乳鐵蛋白的分離純化以及免疫佐劑作用的研究.pdf

1、乳鐵蛋白(Lactoferrin，簡(jiǎn)稱LF)是存在于哺乳動(dòng)物外分泌液中的一種非血紅素鐵結(jié)合糖蛋白，由轉(zhuǎn)鐵蛋白轉(zhuǎn)變而來。1938年SorensenM和SorensenSPL首次從牛乳中分離出來，1953年P(guān)olis等在制備乳過氧化物酶時(shí)得到了它的粗制品。1960年Johansson和Montreuil等從人乳中首次分離出LF。LF是一種多功能蛋白質(zhì)，具有廣譜抗菌、抗病毒感染作用；能調(diào)節(jié)體內(nèi)鐵的平衡；調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，增強(qiáng)機(jī)體抗病能力；能同

2、多種抗生素及抗真菌制劑協(xié)同作用，更有效地治療疾病。 本試驗(yàn)采用鹽析和凝膠層析相結(jié)合的方法分離純化LF。首先將奶牛產(chǎn)犢后24h之內(nèi)的新鮮初乳進(jìn)行乳樣前期處理，除去脂肪和酪蛋白，得到乳清；然后利用鹽析的方法對(duì)乳清進(jìn)行粗分離，硫酸銨濃度分別為30％～50％～80％，除去與LF分子量差異較大的蛋白質(zhì)；然后選用SephadexG-100進(jìn)行凝膠層析，在20℃條件下以0.2mL/min的流速進(jìn)行洗脫，洗脫液選用PH7.4的PBS；待出現(xiàn)峰值

3、后收集樣品，每管收集1mL；經(jīng)SDS-PAGE測(cè)定，所得LF組分顯示為單一區(qū)帶，相對(duì)分子質(zhì)量為90，000Da，LF精制品中LF的純度為92％；利用分光光度法檢測(cè)LF的質(zhì)量濃度為101.73μg/mL。 本試驗(yàn)以蜂膠、左旋咪唑、復(fù)方中藥等新型佐劑作為L(zhǎng)F的對(duì)照，分別制成了添加不同佐劑的油乳劑疫苗和弱毒疫苗，將蛋用型雛雞做為免疫對(duì)象，隨機(jī)分成12組，每組10只，以0.2mL/只為免疫劑量，分別在10日齡頸部皮下注射，同時(shí)采用Clo

4、ne30弱毒苗滴鼻、點(diǎn)眼作基礎(chǔ)免疫。分別于免疫前、首免后5d、10d、15d、和二免后5d、10d、15d、20d、25d、30d、35d時(shí)，從各試驗(yàn)組中隨機(jī)選取5只健康雞無菌采集心血各0.5mL分離血清，采用β-微量血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)新城疫HI抗體效價(jià)。結(jié)果顯示，LF弗氏佐劑疫苗組的HI抗體效價(jià)增長(zhǎng)速度最快，持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng)；LF的免疫增強(qiáng)效果與蜂膠、左旋咪唑和復(fù)方中藥差異不顯著，與油乳劑疫苗、弱毒疫苗差異顯著，與對(duì)照組差異極顯著。說明LF