乳中乳鐵蛋白檢測方法的建立.pdf

1、乳鐵蛋白(LF)是一種存在于哺乳動物外分泌液中的糖蛋白。它具有多種生物活性功能，如廣譜抗菌活性、增強鐵的傳遞和吸收、免疫調(diào)節(jié)作用、調(diào)節(jié)發(fā)炎反應(yīng)、抗病毒作用和抑制脂肪氧化作用，可廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥和化妝品等領(lǐng)域。 本實驗建立快速，準(zhǔn)確的乳鐵蛋白膠體金檢測法。通過純化LF，LF多克隆抗體的制備，膠體金方法的建立和優(yōu)化等實驗。初步建立起來了乳品中乳鐵蛋白膠體金檢測法。 在實驗室條件下研究了離子交換層析技術(shù)純化LF的層析條件。

2、選用帶羧甲基的弱酸性陽離子交換CM-SepHarose Fast Flow行動態(tài)吸附，選用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.6％和5％的NaCI溶液進行階躍洗脫；重復(fù)層析和對洗脫峰分別進行接樣的方法，獲得的LF純度達到96.7％，濃度達到3.2mg/ml。 LF多克隆抗體的制備：本實驗以新西蘭大白兔和高產(chǎn)羅曼蛋雞為免疫對象，新西蘭大白兔免疫劑量為1mg/kg，免疫周期為三周，免疫次數(shù)四次。羅曼蛋雞免疫劑量為0.5mg/kg，免疫周期為兩周?？寡寮?/p>

3、卵黃的處理均采用飽和硫酸銨沉淀法，50％，33％兩個飽和度反復(fù)沉淀。間接ELISA法測效價，抗血清為1:48000。 膠體金檢測LF方法的建立和優(yōu)化。從檢測波長，最佳金探針濃度、最佳溶液PH值、檢測溫度、稀釋液中BSA的濃度和作用時間段六個影響因素進行探討，得出最佳檢測條件即檢測波長為630nm：金探針最佳濃度為1:2；最佳PH值為7.4；稀釋液中BSA的濃度為15 ug/ml；最佳檢測溫度為25℃；作用時間段為0-20min。