BDNF-ERK-CREB信號通路在PFOS神經(jīng)毒性中的作用及機制探討.pdf

1、目的：探索PFOS致SH-SY5Y細胞的毒性作用及其機制，為進一步PFOS神經(jīng)毒性的研究提供實驗依據(jù)。
　　方法：實驗分為對照組（0μM）和 PFOS劑量組（1、10、50、100、150和200μM），通過CCK8法檢測不同濃度PFOS對人源神經(jīng)母瘤細胞（SH-SY5Y細胞）活性的影響及其時效關系；AO/EB雙重熒光染色和Annexin-V FITC/PI雙染法分析PFOS對SH-SY5Y細胞凋亡形態(tài)和凋亡率的影響；紫外和熒光分

2、光光度法檢測 PFOS對SH-SY5Y細胞氧化應激損傷的影響；QPCR檢測PFOS對SH-SY5Y細胞miRNA（has-miR-16和has-miR-22）表達水平以及BDNF、ERK1/2、CREB、DNMT1、DNMT3a和DNMT3b基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平的影響；Elisa方法檢測SH-SY5Y細胞上清液BDNF蛋白水平；Western Blot方法檢測PFOS對SH-SY5Y細胞TrkB、ERK1/2、pERK1/2、CREB、

3、pCREB、DNMT1、DNMT3a和DNMT3b蛋白表達水平的影響。
　　結(jié)果：CCK8實驗結(jié)果顯示各濃度PFOS作用于SH-SY5Y細胞24h和48h后，細胞活性呈染毒時間和染毒劑量依賴性下降。將不同濃度的PFOS染毒SH-SY5Y細胞48h后，經(jīng)AO/EB雙重熒光染色和Annexin-V FITC/PI雙染法流式細胞術(shù)檢測，兩者結(jié)果均顯示SH-SY5Y細胞凋亡比例隨著 PFOS染毒濃度的上升而增加。紫外和熒光分光光度法結(jié)果顯

4、示PFOS引起SH-SY5Y細胞中超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽還原酶（GSH）水平下降，與對照組相比，最高劑量組 PFOS引起 SOD含量從8±0.12nmol/mg蛋白降至5.89±0.9nmol/mg蛋白；同時引起總活性氧（ROS）和丙二醛（MDA）水平上升，與對照相比，最高劑量組 PFOS引起 MDA含量從1.92±0.17nmol/mg蛋白顯著上升至6.95±0.26nmol/mg蛋白。QPCR和Western Blot結(jié)

5、果顯示PFOS干擾了BDNF-ERK-CREB信號通路，與對照組相比，在100μM PFOS劑量組中SH-SY5Y細胞上清液中BDNF蛋白水平由60±1.2ng/mL下降至29±1.5ng/mL;并且可能與SH-SY5Y細胞中has-miR-22水平上調(diào)有關；同時PFOS也干擾了甲基化轉(zhuǎn)移酶DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的表達水平。
　　結(jié)論：
　　1. PFOS染毒顯著降低了SH-SY5Y細胞活性；誘導了SH-SY