基于Shh信號通路研究針刺干預(yù)腦梗死模型大鼠神經(jīng)修復(fù)與發(fā)生的分子機制.pdf

1、目的:本研究旨在觀察腦梗死后Shh信號通路的變化規(guī)律及針刺干預(yù)效應(yīng)，從促進神經(jīng)修復(fù)與再生的角度深入揭示針刺治療腦梗死的分子機制。
　　方法：以Longa腔內(nèi)線栓法復(fù)制大鼠腦梗死模型為研究對象，分為空白組、假手術(shù)組、模型組和針刺組，其中后三組按照術(shù)后1H、3H、6H、9H、12H、24H、3D、7D和12D各分為9個時相組，共28組，每組10只動物。以神經(jīng)功能缺損評分法評估各組動物的神經(jīng)缺損和恢復(fù)情況；采用氯化三苯基四氮唑染色法觀測

2、腦梗死后腦組織缺血體積變化；選取免疫組化法檢測腦梗死后海馬區(qū)突觸素SYP及微管相關(guān)蛋白MAP2、DCX的變化規(guī)律和電針干預(yù)效應(yīng)；應(yīng)用RT-PCR檢測各組動物腦梗死后Shh信號通路相關(guān)因子Shh、Ptched-1、Smo及Gli1的mRNA表達的變化規(guī)律和電針干預(yù)效應(yīng)。
　　結(jié)果：
　　1.針刺對神經(jīng)功能缺損評分的影響：MCAo模型后24H，模型組大鼠NSS評分呈上升趨勢，至24H評分達最高值后呈下降趨勢；針刺組大鼠NSS評分

3、變化趨勢與模型組大致相同，各時相神經(jīng)功能缺損評分均顯著低于同時相模型組，且在6H后有顯著性差異。
　　2.針刺對腦缺血體積的影響：空白組與假手術(shù)組大鼠腦組織TTC染色結(jié)果呈正常深紅色，未見明顯的梗死灶。MCAo后6H，模型組大鼠腦缺血體積均呈上升趨勢，至24H達到峰值后逐漸下降；針刺組腦缺血體積變化趨勢與模型組大致相同，各時相腦缺血體積均小于同時相模型組，且兩組在12H、24H、3D、7D和12D時相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　

4、　3.針刺對突觸素SYP表達的影響：空白組與各時相假手術(shù)組大鼠腦組織SYP蛋白ROD值對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。模型組和針刺組MCAo大鼠SYP蛋白ROD值在3H后均下降，于24H降低至最低點后緩慢上升，在6H后ROD值均低于空白組和同時相假手術(shù)組。針刺組各時相ROD值均高于同時相模型組，且兩組在7D、12D時相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　4.針刺對微管相關(guān)蛋白 MAP2表達的影響：空白組與各時相假手術(shù)組大鼠腦組織MAP2蛋白ROD值和

5、陽性表達面積對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。模型組與針刺組MCAo大鼠MAP2蛋白ROD值和陽性表達面積均在1H后下降，于24H降低至最低點后緩慢上升，ROD值和陽性表達面積在6H后均低于空白組和同時相假手術(shù)組。針刺組各時相ROD值均高于同時相模型組，且兩組在24H、3D、7D和12D時相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義；針刺組各時相陽性表達面積均高于同時相模型組，在9H后相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　5.針刺對雙皮質(zhì)素 DCX蛋白表達的影響：空白組與各時

6、相假手術(shù)組大鼠腦組織DCX蛋白ROD值對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。針刺組和模型組MCAo大鼠DCX蛋白ROD值均在1H后下降，于24H降低至最低點后于3D后緩慢上升，ROD值在6H后均低于空白組和同時相假手術(shù)組。針刺組各時相ROD值均高于同時相模型組，且兩組在24H、3D、7D和12D時相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　6.針刺對Shh通路相關(guān)因子表達的影響：各時相假手術(shù)組Shh通路相關(guān)因子mRNA表達與空白組對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。模型組與針

7、刺組Shh通路相關(guān)基因Shh、Ptch、Smo和GLI1 mRNA表達均呈現(xiàn)“上升-下降-上升”的趨勢，在1H后呈上升趨勢，至12H達到高峰后逐漸下降至3D時達最低點，7D后再次上升，其中：
　?、倌Ｐ徒M各時相Shh mRNA RQ值在9H、12H和12D時與空白組和同時相假手術(shù)組對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義。針刺組各時相RQ值在6H、9H、12H、24H、7D和12D時與空白組和同時相假手術(shù)組對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義。針刺組各時相RQ值均高

8、于同時相模型組，且兩組在12H、24H、7D和12D時相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　?、谀Ｐ徒M各時相Ptch mRNA RQ值在6H、9H、12H和12D時與空白組及同時相假手術(shù)組對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義。針刺組各時相RQ值在6H、9H、12H、24H、7D和12D時與空白組及同時相假手術(shù)組對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義。針刺組各時相RQ值均高于同時相模型組，且兩組在12H、24H、7D和12D時相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　?、勰Ｐ徒M各時相Sm

9、o mRNA RQ值在9H、12H和12D時與空白組和同時相假手術(shù)組對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義。針刺組各時相RQ值在6H、9H、12H、24H、7D和12D時與空白組和同時相假手術(shù)組對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義。針刺組各時相RQ值均高于同時相模型組，且兩組在12H、24H、7D和12D時相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　?、苣Ｐ徒M各時相Gli1 mRNA RQ值在6H、9H、12H和12D時與空白組及同時相假手術(shù)組對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義。針刺組各時相RQ

10、在6H、9H、12H、24H、7D和12D時與空白組及同時相假手術(shù)組差異有統(tǒng)計學(xué)意義。針刺組各時相RQ值均高于同時相模型組，且兩組在12H、24H、7D和12D時相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1.針刺可改善MCAo模型大鼠神經(jīng)功能缺損癥狀，降低MCAo模型大鼠腦缺血體積。
　　2.針刺可減輕梗死周圍區(qū)突觸以及軸突、樹突的損傷，促進突觸以及軸突、樹突的生長；
　　3.針刺可顯著促進MCAo模型大鼠12H、