EGCG對ACC-M細胞株PI3K-Akt信號通路中Akt、p-Akt、NF-κB表達的影響.pdf

1、目的：通過將EGCG與PI3K抑制劑LY294002分別、聯(lián)合應用于ACC-M細胞，檢測細胞的生存情況及Akt、p-Akt、NF-κB的表達情況，初步探討EGCG對涎腺腺樣囊性癌的作用機制。
　　方法：
　　1、MTT法測定不同濃度EGCG與LY294002分別作用ACC-M細胞24h、48h、72h的抑制率，計算藥物半抑制濃度(IC50)；將實驗分為陰性對照組、陽性對照組(LY294002 IC50)、EGCG IC50組

2、、EGCG IC20+LY294002 IC10組、EGCG IC40+LY294002 IC10組，測定48h細胞抑制率。
　　2、普通光學倒置顯微鏡觀察各組藥物作用48h細胞形態(tài)學變化。
　　3、流式細胞術檢測各組藥物作用48h細胞凋亡情況。
　　4、Western blot檢測各組藥物作用48h后細胞中Akt、p-Akt、NF-κB的表達。
　　結(jié)果：
　　1、不同濃度的EGCG(62.5μM、125

3、μM、250μM、500μM)與不同濃度的LY294002(6.25μM、12.5μM、25μM、50μM、100μM)分別作用ACC-M細胞24h、48h、72h，與陰性對照組相比EGCG、LY294002對ACC-M對細胞的抑制作用具有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。藥物作用48h時 EGCG與 LY294002的IC50分別為156.28μM與30.88μM。陽性對照組、EGCG IC50組、EGCG IC20+LY294002 IC

4、10組、EGCG IC40+LY294002 IC10組的48h細胞抑制率分別為51.65％、51.48%、31.52%和56.65%。
　　2、細胞觀察實驗可見藥物作用ACC-M細胞48h后，細胞數(shù)量減少、間隙增加，由多邊形變?yōu)樗笮?，細胞脫壁，部分細胞漂浮在培養(yǎng)基中呈凋亡狀態(tài)。
　　3、流式細胞術示所有用藥組細胞凋亡率均高于陰性對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；EGCG IC50組細胞凋亡率低于陽性對照組，而EGC

5、G IC40+LY294002 IC10組細胞凋亡率高于陽相對照組，差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　4、Western blot示，與陰性對照組相比，所有用藥組的p-Akt表達降低(P<0.05)；EGCG IC50組、EGCG IC20+LY294002 IC10組、EGCG IC40+LY294002 IC10組的Akt、NF-κB表達量均低于陰性對照組(P<0.05)。
　　結(jié)論：EGCG、LY294002