Vaspin對棕櫚酸誘導的INS-1細胞PI3K-Akt和NF-κB信號通路的影響.pdf

1、目的：
　　1、研究vaspin對棕櫚酸誘導的INS-1胰島β細胞的胰島素抵抗和胰島炎癥的分子機制；
　　2、研究vaspin是否可通過PI3K/Akt胰島素信號通路和NF-κB炎癥信號通路影響INS-1細胞的功能。
　　方法：
　　為了探討vaspin對PI3K/Akt和NF-κB信號通路的影響以及確定合適的vaspin濃度，以INS-1細胞為研究對象分為5組：（1）對照組：完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，不加干預因素；（2）

2、PA（棕櫚酸）組：0.5 mmol/l棕櫚酸培養(yǎng)；（3）PA+vaspin（80 ng/ml）組：0.5 mmol/l棕櫚酸+80 ng/ml的vaspin培養(yǎng)；（4）PA+vaspin（160 ng/ml）組：0.5 mmol/l棕櫚酸+160 ng/ml的vaspin培養(yǎng)；（5）PA+vaspin（320 ng/ml）組：0.5 mmol/l棕櫚酸+320ng/ml的vaspin培養(yǎng)。Real-Time PCR檢測上述5組細胞IRS

3、-1、IRS-2、Akt、NF-κB的mRNA表達水平；Western blot檢測IRS-2、pIRS-2、Akt、pAkt、NF-κB P65蛋白的表達水平。
　　確定vaspin的合適濃度為320 ng/ml后，為了觀察vaspin是否可通過激活PI3K/Akt信號通路介導INS-1細胞的分泌功能，實驗分為3組：（1）對照組：0.5 mmol/l棕櫚酸培養(yǎng)；（2）vaspin組：0.5 mmol/l棕櫚酸+320 ng/ml

4、的vaspin培養(yǎng)；（3）vaspin+ly294002（PI3K抑制劑）組：0.5 mmol/l棕櫚酸+320 ng/ml的vaspin培養(yǎng)+25μmol/l的PI3K抑制劑ly294002培養(yǎng)。為了觀察vaspin是否可通過抑制NF-κB信號通路介導INS-1細胞的分泌功能，以INS-1細胞為研究對象，并分為3組：（1）對照組：0.5 mmol/l棕櫚酸培養(yǎng)；（2）vaspin組：0.5 mmol/l棕櫚酸+320 ng/ml的va

5、spin培養(yǎng)；（3）TPCK（NF-кB抑制劑）組：作為陽性對照，0.5 mmol/l棕櫚酸+20μmol/l的NF-кB抑制劑TPCK培養(yǎng)。Real-Time PCR檢測上述分組細胞Akt、NF-κB的mRNA表達水平；Western blot檢測Akt、pAkt、NF-κB P65蛋白的表達水平。ELISA檢測葡萄糖刺激的胰島β細胞分泌胰島素的水平。
　　結(jié)果：
　　1.Vaspin對PI3K/Akt和NF-κB信號通路

6、的影響
　　與對照組相比，PA組IRS-2 mRNA、總的IRS-2蛋白、Akt的磷酸化水平（pAkt）和pAkt/Akt比例明顯降低（P<0.05），NF-κB mRNA、NF-κB P65蛋白、IRS-2的磷酸化水平（pIRS-2）、pIRS-2/總IRS-2蛋白的比例明顯增高（P<0.05）。和PA組相比，PA+vaspin（80 ng/ml）組、PA+vaspin（160 ng/ml）組、PA+vaspin（320 ng/

7、ml）組使IRS-2 mRNA、總的IRS-2蛋白、pAkt和pAkt/Akt的比例明顯上調(diào)和增高（P<0.05）；NF-κB mRNA、NF-κB P65蛋白、pIRS-2和pIRS-2/總IRS-2蛋白的比例明顯降低（P<0.05）。
　　2.Vaspin對PI3K/Akt信號通路介導的INS-1胰島β細胞功能的影響
　　與對照組相比，vaspin組INS-1細胞pAkt/Akt的比例和葡萄糖刺激的INS-1細胞分泌的胰

8、島素水平明顯增高（P<0.05）。而vaspin+ly294002（PI3K抑制劑）組和vaspin組相比，pAkt/Akt的比例和葡萄糖刺激的INS-1細胞分泌的胰島素水平下降（P<0.05）。
　　3.Vaspin對NF-κB信號通路介導的INS-1胰島β細胞功能的影響
　　與對照組相比，vaspin組和TPCK（NF-кB抑制劑）組INS-1細胞NF-κB mRNA和NF-κB P65蛋白的水平下調(diào)（P<0.05），葡

9、萄糖刺激的INS-1細胞分泌的胰島素水平明顯增高（P<0.05）。與vaspin組相比，TPCK組NF-κB mRNA和NF-κB P65蛋白的水平增高（P<0.05），葡萄糖刺激的INS-1細胞分泌的胰島素水平下降（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　棕櫚酸可誘導胰島β細胞產(chǎn)生胰島素抵抗和炎癥，vaspin激活 PI3K/Akt信號通路和抑制NF-κB信號通路改善棕櫚酸誘導的胰島β細胞胰島素抵抗和抑制胰島β細胞炎癥，并改善葡