ICA對ACC-M細胞株PI3K-AKT信號通路中AKT、p-AKT和NF-κB表達的影響.pdf

1、目的：研究 PI3K抑制劑 LY294002、ICA以及他們聯(lián)合應用于 ACC-M細胞后， PI3K/AKT信號通路中AKT、p-AKT、NF-κB表達的變化，初步探討ICA對涎腺腺樣囊性癌的作用機制。
　　方法：將實驗分為陰性對照組、陽性對照組(LY294002 IC50組)、ICA IC50組、ICA IC20+LY294002 IC10組、ICA IC40+LY294002 IC10組。1.用不同濃度的ICA、LY29400

2、2作用ACC-M細胞24h、48h、72h，用MTT法測定細胞的抑制率，選取藥物作用的最佳時間并計算出該作用時間下的抑制濃度(IC10 IC20 IC25 IC30 IC40 IC50)；篩選出聯(lián)用組藥物濃度。2.采用普通光學倒置顯微鏡觀察各組細胞的形態(tài)學變化。3.流式細胞儀檢測各組細胞的凋亡情況。4.通過Western-blot檢測各組細胞中AKT、p-AKT及NF-κB蛋白的表達情況。
　　結(jié)果：1.不同濃度的ICA(25μg

3、/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)作用ACC-M細胞24h、48h、72h，發(fā)現(xiàn)ICA對ACC-M細胞具有顯著的抑制增殖的作用(P<0.05)，且具有濃度依賴性和時間依賴性。不同濃度的LY294002(6.25μmol/l、12.5μmol/l、25μmol/l、50μmol/l、100μmol/l)作用ACC-M細胞24h、48h、72h，發(fā)現(xiàn)LY294002對ACC-M細胞具有顯著的抑制增

4、殖的作用(P<0.05)，同樣具有濃度依賴性和時間依賴性。發(fā)現(xiàn) ICA和 LY294002的最佳作用時間為48h，計算得到 ICA和LY294002的IC50分別為123.67μg/ml(185.2μmol/l)、30.88μmol/l，并檢測到了聯(lián)用組IC50的匹配濃度(ICA IC40+LY294002 IC10)。2.與陰性對照組相比，LY294002 IC50組、ICA IC50組、ICA IC20+LY294002 IC10組

5、、ICA IC40+LY294002 IC10組的細胞密度降低，間隙變大，細胞逐漸由多邊形變?yōu)樗笮?，細胞脫壁，一部分細胞漂浮在培養(yǎng)基中呈凋亡狀態(tài)。3. ICA IC40+LY294002 IC10組作用ACC-M細胞后，細胞凋亡率較LY294002 IC50組、ICA IC50組、ICA IC20+LY294002 IC10組作用明顯增加(P<0.05)。ICAIC20+LY294002 IC10組凋亡率要比ICA IC50組高，但比L

6、Y294002 IC50組低。4.與陰性對照組相比，LY294002 IC50組、ICA IC50組以及ICA IC20+LY294002 IC10組、ICA IC40+LY294002 IC10組中p-AKT蛋白表達明顯下降，且ICA IC20+LY294002 IC10組、ICA IC40+LY294002 IC10組的p-AKT表達量均低于LY294002 IC50和ICA IC50兩個單獨用藥組(P<0.05)。LY294002

7、 IC50組中AKT、NF-κB蛋白表達與陰性對照組相比沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)，而 ICA IC50組以及 ICA IC20+LY294002 IC10組、ICA IC40+LY294002 IC10組中AKT、NF-κB蛋白的表達與陰性對照組相比略降低(P<0.05)，且ICA IC20+LY294002 IC10組、ICA IC40+LY294002 IC10組中AKT、NF-κB的表達量低于ICA IC50組。