血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2激動劑抑制視網(wǎng)膜色素上皮細胞炎癥反應(yīng)的作用及機制.pdf

1、目的：我們前期研究發(fā)現(xiàn)，激動血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2(ACE2)對不同動物EIU有明顯的抑制作用，但其具體的抗炎機制尚未完全明確，本實驗進一步探討ACE2激動劑三氮脒(DIZE)對LPS誘導(dǎo)人類RPE細胞炎癥反應(yīng)的抗炎作用及機制。
　　方法：使用CCK-8和real-time PCR確定DIZE的適宜作用濃度和適宜作用時間。10μg/mL DIZE預(yù)先處理細胞6小時后，用5μg/mL LPS刺激細胞24小時。Real-time PCR和

2、ELISA分別檢測IL-6,IL-8和MCP-1的mRNA和蛋白表達水平；Western blotting檢測p38，ERK1/2,JNK磷酸化水平和NF-κB的活化標志p-IκB蛋白水平。觀察p38,ERK1/2,JNK和NF-κB通路抑制劑對LPS誘導(dǎo)的細胞炎癥反應(yīng)影響。使用siRNA沉默ACE2基因的表達和Ang-(1-7)選擇性拮抗劑A779驗證DIZE通過激動ACE2/Ang-(1-7)/MasR軸發(fā)揮抗炎作用。
　　結(jié)

3、果：在LPS誘導(dǎo)的RPE炎癥反應(yīng)中，DIZE明顯升高ACE2的mRNA和蛋白表達水平，同時抑制IL-6，IL-8和MCP-1的表達水平。DIZE下調(diào)了LPS誘導(dǎo)的RPE細胞p38,ERK1/2,JNK的磷酸化水平和p-IκB蛋白水平。p38,ERK1/2,JNK和NF-κB通路抑制劑均明顯抑制了LPS誘導(dǎo)的IL-6,IL-8和MCP-1表達水平的升高。另外，siRNA沉默ACE2和A779抵消了DIZE的保護作用。
　　結(jié)論：DI