血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2激動(dòng)劑抑制視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的作用及機(jī)制.pdf

1、目的：我們前期研究發(fā)現(xiàn)，激動(dòng)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2(ACE2)對(duì)不同動(dòng)物EIU有明顯的抑制作用，但其具體的抗炎機(jī)制尚未完全明確，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探討ACE2激動(dòng)劑三氮脒(DIZE)對(duì)LPS誘導(dǎo)人類RPE細(xì)胞炎癥反應(yīng)的抗炎作用及機(jī)制。
　　方法：使用CCK-8和real-time PCR確定DIZE的適宜作用濃度和適宜作用時(shí)間。10μg/mL DIZE預(yù)先處理細(xì)胞6小時(shí)后，用5μg/mL LPS刺激細(xì)胞24小時(shí)。Real-time PCR和

2、ELISA分別檢測(cè)IL-6,IL-8和MCP-1的mRNA和蛋白表達(dá)水平；Western blotting檢測(cè)p38，ERK1/2,JNK磷酸化水平和NF-κB的活化標(biāo)志p-IκB蛋白水平。觀察p38,ERK1/2,JNK和NF-κB通路抑制劑對(duì)LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞炎癥反應(yīng)影響。使用siRNA沉默ACE2基因的表達(dá)和Ang-(1-7)選擇性拮抗劑A779驗(yàn)證DIZE通過(guò)激動(dòng)ACE2/Ang-(1-7)/MasR軸發(fā)揮抗炎作用。
　　結(jié)

3、果：在LPS誘導(dǎo)的RPE炎癥反應(yīng)中，DIZE明顯升高ACE2的mRNA和蛋白表達(dá)水平，同時(shí)抑制IL-6，IL-8和MCP-1的表達(dá)水平。DIZE下調(diào)了LPS誘導(dǎo)的RPE細(xì)胞p38,ERK1/2,JNK的磷酸化水平和p-IκB蛋白水平。p38,ERK1/2,JNK和NF-κB通路抑制劑均明顯抑制了LPS誘導(dǎo)的IL-6,IL-8和MCP-1表達(dá)水平的升高。另外，siRNA沉默ACE2和A779抵消了DIZE的保護(hù)作用。
　　結(jié)論：DI