EPO抑制人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞氧化損傷線粒體機(jī)制的探討.pdf

1、本文探討了促紅細(xì)胞生成素(erythropoietin；EPO)抑制人視網(wǎng)膜色素上皮(retinal pigment epithelial;RPE)細(xì)胞氧化損傷中線粒體凋亡信號途徑的作用機(jī)制。 方法：體外培養(yǎng)的人RPE細(xì)胞隨機(jī)分為正常組、氧化損傷組及EPO處理組；氧化損傷組中分別加入200和400、600、800μ mol/L過氧化氫(Hydrogen peroxide；H2O2)培養(yǎng)24h，建立氧化損傷模型；EPO處理組則在細(xì)

2、胞氧化損傷同時加入40IU/mlEPO培養(yǎng)24h。采用吉姆薩染色法觀察干預(yù)前后人RPE細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，免疫組織化學(xué)方法檢測凋亡誘導(dǎo)因子(apoptosis-inducing factor；AIF)和細(xì)胞色素C(cytochrome C； CytC)在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)及分布情況，免疫印跡法檢測細(xì)胞漿中CytC及胞核內(nèi)AIF蛋白表達(dá)的變化。 結(jié)果：(1)吉姆薩染色發(fā)現(xiàn)，氧化損傷組隨H2O2濃度增加逐漸出現(xiàn)凋亡小體，凋亡細(xì)胞數(shù)呈劑量依賴性

3、升高；與H2O2損傷組相比，EPO治療組細(xì)胞完整性增強(qiáng)，凋亡細(xì)胞數(shù)減少。(2)免疫組織化學(xué)顯示：正常人RPE細(xì)胞CytC表達(dá)于線粒體中，表現(xiàn)為胞漿顆粒狀淡褐染。隨H2O2濃度增加，陽性細(xì)胞因CytC釋入胞漿而表現(xiàn)為胞漿褐染帶增寬，平均光密度值增高；其中600 μmol/LH2O2處理組陽性表達(dá)達(dá)到高峰，同一濃度EPO處理組與氧化損傷組相比較，平均光密度值均明顯下降，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；正常組人RPE細(xì)胞AIF染色為胞漿淡黃

4、褐色，隨H2O2濃度增高，陽性表達(dá)逐漸增強(qiáng)，平均光密度值增高，表現(xiàn)為細(xì)胞胞漿著色加深，且向胞核轉(zhuǎn)位，其在各組中表達(dá)趨勢同CytC。(3)免疫蛋白印跡法顯示：正常人RPE細(xì)胞胞漿中有cytC蛋白弱表達(dá)，而胞核中未見AIF蛋白表達(dá)，隨著H2O2濃度的升高，CytC及AIF蛋白表達(dá)增強(qiáng)，與正常對照組相比，各亞組中CytC及AIF蛋白水平明顯增高，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。而EPO處理組，CytC及AIF蛋白水平較H2O2損傷組明顯減弱