白皮杉醇抑制視網膜色素上皮細胞光氧化損傷機制研究.pdf

1、隨著年齡的增加，維生素A二聚物在視網膜色素上皮細胞中逐漸累積，其介導的視網膜色素上皮細胞（Retinal pigment epithelium，RPE）光氧化損傷會引起年齡相關性視網膜病變。目前，通過膳食補充天然抗氧化劑是抑制RPE細胞光氧化損傷，是預防及延緩年齡相關性視網膜病變的主要手段。葡萄中多酚類化合物已被證明可以顯著抑制RPE細胞的光氧化損傷[1]。白皮杉醇（Piceatannol）是其中一種含有二苯乙烯結構的多酚類化合物，具有

2、顯著的抗氧化生物活性，但其抑制RPE光氧化損傷的作用及機制尚未闡明。
　　本論文主要研究白皮杉醇抑制RPE細胞光氧化損傷作用及機制，為模仿維生素A二聚物介導的RPE細胞光氧化損傷，本文采用藍光照射荷載維生素A二聚物A2E（N-亞視-N-視黃基-乙醇胺）的ARPE-19細胞作為RPE細胞光氧化損傷模型，探討白皮杉醇對RPE細胞的保護作用及機制。主要研究內容及結果包括：
　　1.白皮杉醇對ARPE-19細胞光氧化損傷有顯著的抑制

3、作用，ARPE-19細胞經光氧化損傷后，凋亡細胞比例明顯增加（p<0.01）；經白皮杉醇對ARPE-19細胞進行預處理，光氧化損傷細胞的凋亡水平有下降趨勢，當白皮杉醇濃度為1μM時，白皮杉醇對細胞凋亡有顯著性抑制作用（p<0.01），與未經白皮杉醇處理的光損傷細胞相比凋亡率下降了52%。
　　2.ARPE-19細胞受到光氧化損傷，細胞內ROS的水平顯著提高（p<0.01）。經過白皮杉醇預處理，光氧化損傷細胞內ROS水平與未經白皮杉

4、醇處理的光氧化損傷細胞相比有明顯的下降，白皮杉醇的濃度為5μM時，ROS水平與損傷組比較顯著性降低（p<0.05）
　　3.白皮杉醇促進ARPE-19細胞中Nrf2核位移，從而顯著上調Nrf2下游抗氧化酶血紅素氧合酶（HO-1）及醌氧化還原酶（NQO-1）在蛋白水平和mRNA水平的表達（p<0.05）。在轉染Nrf2 siRNA的ARPE-19細胞中，白皮杉醇上調HO-1和NQO-1的表達的作用受到抑制，證明白皮杉醇通過Nrf2上

5、調抗氧化酶HO-1及NQO-1的表達。
　　4.白皮杉醇顯著提高ARPE-19細胞中p-AKT的表達（p<0.05），而且PI3K抑制劑LY294002可阻斷白皮杉醇上調HO-1、NQO-1的表達，從而阻斷白皮杉醇對RPE細胞的保護作用，表明PI3K/AKT參與白皮杉醇對Nrf2抗氧化通路的激活作用。
　　5.白皮杉醇抑制光氧化損傷引發(fā)的ARPE-19細胞內質網應激（endoplasmic reticulum stress，

6、ER stress），顯著降低內質網應激凋亡蛋白CHOP的表達（p<0.01）；此外，下調ER stress標志性分子ATF6及p-IRE1α的表達水平。在轉染Nrf2 siRNA的ARPE-19細胞中，白皮杉醇降低CHOP表達的作用被阻斷（p<0.01）。由此證明，白皮杉醇通過激活Nrf2信號通路抑制光氧化損傷引起的ER stress。
　　綜上所述，本文首次闡明了白皮杉醇抑制ARPE-19細胞光氧化損傷的作用及機理。白皮杉醇通