MMP-9、TIMP-1在孕鼠羊水栓塞發(fā)病機制的實驗性研究.pdf

1、目的：本課題擬使用孕鼠模擬產婦羊水栓塞的過程，通過免疫組化檢測孕鼠羊水栓塞后肺組織中基質金屬蛋白酶9(MMP-9)及基質金屬蛋白酶抑制劑1(TIMP-1)的表達， ELISA法檢測血清及羊水中的MMP-9和TIMP-1前后的變化，探討其與羊水栓塞的關系，為法醫(yī)學死因鑒定和臨床診斷提供參考。
　　方法：30只健康 SD孕晚期大鼠，體重300±50g（第三軍醫(yī)大實驗動物部提供），隨機分為生理鹽水組（NS組，n=10）、羊水原液組（AF

2、組，n=10）、羊水-胎糞液組（MAF組，n=10）；麻醉生效后先予眼眶取血1ml，子宮次全切除術取下子宮并破膜取羊水5ml，部分用于配成羊水原液；另用胎鼠取胎糞，配成羊水-胎糞液；從腹主靜脈注入 NS、羊水原液、羊水-胎糞液后，觀察1h，再取血2ml，標本離心（3000r/min，10min）、分離，-80℃保存待檢。處死大鼠取右肺組織及相連的支氣管用于石蠟包埋、切片、HE染色和免疫組化。實驗定量資料以均數±標準差( x±s)表示，采

3、用軟件SPSS17.0進行統(tǒng)計分析，各組數據先進行正態(tài)分布檢驗，符合者組內進行t檢驗，組間進行方差分析，以α=0.05作為檢驗水準；不符合者選擇秩和檢驗，以α=0.05作為檢驗水準。
　　結果：
　　1.臨床表現：NS組孕鼠從腹主靜脈注入生理鹽水后出現短暫性呼吸加快，嘴唇稍發(fā)紺，心率增快，1~2min后逐漸恢復，穿刺腹主動脈抽血后止血時間為1~3 min；AF組較NS組出現心率增快早，并伴有呼吸頻率加快，然后變慢，且持續(xù)時間

4、更長，期間出現局部抽搐、嘴唇發(fā)紺、大小便失禁等癥狀，穿刺后止血時間為3~6 min；MAF組出現類似癥狀時間更早且更嚴重，并且伴有凝血功能障礙表現，穿刺后止血時間10~15 min；3組中未見死亡案例。
　　2.病理學檢查：肉眼觀：NS組肺組織表面光滑，呈暗紅色，AF組表面粗糙、淡紅色， MAF組表面粗糙、粉紅色。HE染色顯示：NS組未見明顯異常；AF組及MAF組的大鼠肺組織均可見炎性細胞浸潤，以MAF組更為明顯，部分肺血管內可見

5、到染成淡粉色的不定形物質及絲狀物。
　　3.CK16 IHC染色顯示：NS組未見明顯異常；AF組和MAF組在大鼠肺血管可見呈棕黃色、細絲狀角化鱗狀上皮。
　　4.大鼠羊水和羊水-胎糞液中MMP-9、TIMP-1 ELISA法檢測結果示：MMP-9羊水原液濃度約為（3.105±0.345）μg/L，羊水-胎糞液濃度約為（6.125±0.543）μg/L；TIMP-1的羊水原液濃度約為（99.105±3.145）pg/mL，羊水

6、-胎糞液濃度約為（55.335±2.543） pg/mL。
　　5.大鼠血清MMP-9 ELISA法檢測結果示：NS組實驗前、后，三組實驗前兩兩比較無統(tǒng)計學意義（p>0.05），AF組及MAF組實驗前后比較有統(tǒng)計學意義（p<0.05），MAF組與AF組及NS組、AF組與NS組比較均有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。
　　6.大鼠血清TIMP-1 ELISA法檢測結果示：NS組實驗前、后，三組實驗前兩兩比較無統(tǒng)計學意義（p>0.0

7、5），AF組及MAF組實驗前后比較有統(tǒng)計學意義（p<0.05），MAF組與AF組及NS組、AF組與NS組比較均有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。
　　7.MMP-9/TIMP-1血清實驗前后動態(tài)平衡情況：NS組實驗前（5.856±0.105）；注入生理鹽水后（6.246±0.135）；AF組實驗前（5.759±0.128），注入羊水原液后（7.278±0.095）；MAF組實驗前（5.657±0.123），注入羊水-胎糞液后（10.5

8、52±0.996）。
　　8.MMP-9、TIMP-1 IHC結果示：NS組肺泡內組織細胞、漿細胞及中心粒細胞中見MMP-9少量表達，顏色較淺，而TIMP-1大量表達，顏色較深；AF組、MAF組肺泡內組織細胞、漿細胞及中心粒細胞中可見MMP-9中到大量表達，顏色較深，其中MAF組更加明顯；以及見TIMP-1一定量表達，顏色較淺。
　　結論：
　　1.通過HE染色、IHC方法證實大鼠羊水栓塞模型建立成功。
　　2.