補腎解毒通絡方對急性實驗性自身免疫性腦脊髓炎大鼠MMP-9、TIMP-1的影響.pdf

1、　　目的： 觀察補腎解毒通絡方對 W istar 大鼠實驗性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的臨床癥狀表現(xiàn)、中樞神經(jīng)組織 病 理 學 改 變 及 發(fā) 病 過 程 中 基 質(zhì) 金 屬 蛋 白 酶 -9 ( matrix metalloproteinase-9,MMP-9)和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1(tissue inhibitor of matrix meta

2、lloproteinases,TIMP-1)的影響,探討對中藥對EAE大鼠的防治作用和機制,為中藥治療多發(fā)性硬化癥(multiple sclerosis,MS)提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　(1)EAE模型建立：采用豚鼠脊髓勻漿法制作抗原,免疫誘導Wistar大鼠建立急性EAE模型,觀察大鼠臨床體征,記錄每日體重和神經(jīng)功能評分。
　　(2)實驗動物分組及給藥：設立補腎解毒通絡方高、中、低劑量組預防性給藥,同時設

3、置激素組、空白組、EAE組及中藥空白組。
　　(3)標本采集：分別于免疫后第15天(發(fā)病高峰期)和21天(恢復期)處死動物,采用心臟灌流法取腦、脊髓置于4%多聚甲醛中固定,石蠟包埋、切片。
　　(4)蘇木素-伊紅(HE)法染色觀察腦、脊髓病理改變；SP (streptavidin-perosidase)法免疫組化染色觀察腦、脊髓病理改變。
　　結果：(1)補腎解毒通絡方高、中劑量組大鼠的發(fā)病率與 EAE 組相比明

4、顯減低(P<0.01),高劑量組與激素組發(fā)病率無明顯差異；補腎解毒通絡方高、低組大鼠的平均潛伏期較 EAE 組明顯延長(P<0.01),與激素組無顯著差異(P>0.05)；補腎解毒通絡方高、中劑量組大鼠急性期、緩解期的神經(jīng)功能評分明顯低于 EAE 組,兩組與激素組相比無顯著差異；補腎解毒通絡方高劑、中劑量組大鼠急性期、緩解期的體重明顯高于 EAE 組、中藥低劑量組,兩組與激素相比無顯著差異(P<0.05)。
　　(2)急性期補腎

5、解毒通絡方高、中、低劑量組大鼠CNS中炎性病灶數(shù)與EAE組相比顯著減少(P<0.01),高劑量組與激素組相比無顯著差異(P>0.05),中、低劑量組顯著多于激素組(P<0.01)；緩解期補腎解毒通絡方高、中劑量組大鼠 CNS 中炎性病灶數(shù)與 EAE 組相比顯著減少(P<0.01),高、中劑量組與激素組相比無顯著差異(P>0.05),低劑量組顯著多于激素組(P<0.01)。
　　(3)急性期與EAE組相比,除中藥低劑量組脊髓組織外

6、、其余各組大鼠CNS中 MMP-9 的表達水平均有顯明顯降低,有顯著性差異(P<0.05)；與激素組相比,中藥中、低劑量組大鼠CNS中MMP-9的表達水平均有顯明顯升高,有顯著性差異(P<0.05)；緩解期與EAE組相比,其余各組大鼠CNS中MMP-9的表達水平均有顯明顯降低,有顯著性差異(P<0.05)；與激素組相比,中藥高劑量組脊髓組織的MMP-9表達顯著降低(P<0.05),中藥中、低劑量組CNS中MMP-9表達較激素組顯著升高,

7、(P<0.05)。急性期與 EAE 組相比,其余各組大鼠 CNS中 TIMP-1 的表達水平均有顯明顯降低,有顯著性差異(P<0.05)；與激素組相比,中藥中、低劑量組大鼠CNS中TIMP-1的表達水平均有顯明顯升高,有顯著性差異(P<0.05)；中藥高劑量組大鼠CNS中TIMP-1的表達有顯著降低(P<0.05)；緩解期與EAE組相比,其余各組大鼠CNS中TIMP-1的表達水平均有顯明顯降低,有顯著性差異(P<0.05)；與激素組相比

8、,中藥中、低劑量組大鼠CNS中TIMP-1的表達水平均有顯明顯升高,有顯著性差異(P<0.05)；中藥高劑量組大鼠脊髓中TIMP-1的表達有顯著降低(P<0.05)。
　　結論：(1)豚鼠脊髓勻漿法制備抗原,采用GPSCH+CFA+PBV聯(lián)合免疫Wistar大鼠制備EAE動物模型,方法可靠,成功率較高。
　　(2)補腎解毒通絡方可以明顯降低急性EAE大鼠的發(fā)病率、緩解臨床癥狀、縮短病程。
　　(3)補腎解毒通絡方