人牙髓干細(xì)胞體外三維培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)觀察.pdf

1、牙髓組織屬于疏松結(jié)締組織，具有修復(fù)和再生能力。牙髓干細(xì)胞(dentalpulpstemcells,DPSCs)是位于牙髓組織的一種成體干細(xì)胞，具有多向分化、自我更新和高度增殖能力，有望成為牙齒再生修復(fù)組織工程的細(xì)胞來(lái)源。 本課題圍繞組織工程的三要素：即種子細(xì)胞、生物支架材料和細(xì)胞與材料之間的相互作用，對(duì)人牙髓干細(xì)胞(humandentalpulpstemcells，hDPSCs)進(jìn)行分離培養(yǎng)及鑒定，并對(duì)北京化工大學(xué)研制的組織工程

2、生物支架材料—電紡聚L-乳酸納米纖維(electrospunPLLAnanofiber)生物相容性進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)研究。首先分離培養(yǎng)hDPSCs，參照骨髓間充質(zhì)細(xì)胞體外多向分化的誘導(dǎo)條件，對(duì)hDPSCs進(jìn)行礦化誘導(dǎo)分化培養(yǎng)和鑒定，然后將分離所得的hDPSCs種植在電紡聚L-乳酸納米纖維生物支架上，進(jìn)行細(xì)胞與材料復(fù)合的體外三維立體培養(yǎng)，掃描電鏡觀察hDPSCs在材料上的黏附、伸展及生長(zhǎng)情況，采用四唑氮鹽(MTT)檢測(cè)材料對(duì)細(xì)胞增殖的影響；腺病

3、毒載體介導(dǎo)的綠色熒光蛋白(GFP)追蹤材料上hDPSCs的生長(zhǎng)，為牙齒再生修復(fù)組織工程的生物材料和種子細(xì)胞的篩選以及后續(xù)體內(nèi)植入研究奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。所得結(jié)論如下： 1、采用組織塊培養(yǎng)法成功分離培養(yǎng)人牙髓細(xì)胞，對(duì)所得成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化持續(xù)培養(yǎng)21天，細(xì)胞內(nèi)ALP檢測(cè)、礦化結(jié)節(jié)VonKossa、茜素紅染色、DSP免疫組化檢測(cè)陽(yáng)性，證實(shí)所得細(xì)胞含有具備分化潛力和增殖能力的牙髓干細(xì)胞(DPSCs)，為組織工程化牙本質(zhì)牙髓復(fù)合體提

4、供了可靠的種子細(xì)胞來(lái)源。 2、研究結(jié)果提示PLLA/HA/MWNTs生物相容性良好，對(duì)hDPSCs的生長(zhǎng)增殖有明顯的促進(jìn)作用，在組織工程領(lǐng)域有較好的應(yīng)用前景；掃描電鏡結(jié)果提示已成功進(jìn)行hDPSCs體外三維立體培養(yǎng)，為牙齒再生修復(fù)的組織工程研究奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 3、GFP對(duì)hDPSCs轉(zhuǎn)染效果較好，流式分析轉(zhuǎn)染率達(dá)92﹪，提示可以利用腺病毒載體轉(zhuǎn)染hDPSCs，并可作為hDPSCs體外三維立體培養(yǎng)和體內(nèi)植入實(shí)驗(yàn)的示蹤標(biāo)記來(lái)