肥大細(xì)胞在心源性猝死發(fā)生發(fā)展中的作用.pdf

1、背景與目的：心源性猝死(sudden cardiac death,SCD)，是指平素健康或病情穩(wěn)定的人，由于心臟的原因，引起的以驟然意識喪失為前驅(qū)癥狀的出乎意料的快速死亡。SCD的發(fā)生具有自發(fā)性、突然性和不可預(yù)測性，大多數(shù)SCD患者在毫無先兆的情況下突然發(fā)生，短時(shí)間內(nèi)死于院外，并且很少有機(jī)會進(jìn)行臨床檢查和救治，其死因經(jīng)尸體解剖目前未發(fā)現(xiàn)有明確的形態(tài)學(xué)證據(jù)，一直是法醫(yī)病理學(xué)死因鑒定的難題。本研究針對這一難題，選取法醫(yī)病理實(shí)踐中遇到的猝死病

2、例，進(jìn)行分類分組，旨在探討不同誘因下如酗酒、爭斗等應(yīng)激事件中，心源性猝死的發(fā)病機(jī)制，尋找可靠地形態(tài)學(xué)依據(jù)。
　　眾所周知肥大細(xì)胞在急性超敏反應(yīng)，如哮喘、蕁麻疹等病理機(jī)制中發(fā)揮重要的作用，心源性猝死也為急性反應(yīng)事件。肥大細(xì)胞在心性猝死中的作用引起我們課題組的重視，前期也進(jìn)行了初步探討。也有研究發(fā)現(xiàn)肥大細(xì)胞在動脈粥樣硬化病變的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮一定作用，因此本研究把肥大細(xì)胞在心臟中的分布、活化和反應(yīng)情況作為重點(diǎn)觀察指標(biāo)，通過珍貴的人體樣本

3、和動物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行研究。
　　材料與方法：
　　1、人體組織標(biāo)本：查閱并收集汕頭大學(xué)司法鑒定中心共36例病理尸體解剖的冠脈各分支和心肌組織標(biāo)本（包括8例酒精相關(guān)心源性猝死組、10例精神應(yīng)激相關(guān)心源性猝死組、18例非心源性猝死組），共計(jì)109支冠脈和84例心肌標(biāo)本，對其進(jìn)行組織病理學(xué)及免疫組織化學(xué)觀察分析。
　　2、建立小鼠急性酒精中毒模型：成年APOE基因敲除小鼠32只，隨機(jī)分成急性灌酒組（16只）及對照組（16只）。灌酒

4、組一次性以食用白酒灌胃，灌胃劑量為20ml/kg。對照組一次性灌入同等容積的自來水。灌胃2小時(shí)后解剖全部的32只小鼠，并獲取心臟組織。
　　3、蘇木素-伊紅染色（HE染色）：觀察人體及動物模型心肌和冠脈標(biāo)本的組織病理學(xué)改變。
　　4、免疫組織化學(xué)檢測：用類胰蛋白酶標(biāo)記肥大細(xì)胞，檢測人體冠脈及心肌組織中肥大細(xì)胞類胰蛋白酶表達(dá)，用腎素及腎素血管緊張素Ⅱ1型受體（AT1R）抗體染色觀察人體和小鼠心臟中的表達(dá)情況。
　　5、麗

5、春紅S/維多利亞藍(lán)復(fù)合染色（P/VB特殊染色）：能將冠脈血管的彈力纖維染成亮綠色，膠原纖維染成紅色，平滑肌纖維染成黃色，使冠脈結(jié)構(gòu)清晰、鮮明，便于觀察冠脈的病變情況。
　　6、肥大細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色法：可以將肥大細(xì)胞標(biāo)記出來，肥大細(xì)胞顆粒被染成紫紅色，細(xì)胞核呈現(xiàn)為藍(lán)色。
　　7、統(tǒng)計(jì)分析：用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，采用單因素方差分析、成組t檢驗(yàn)、Pearson相關(guān)分析。
　　結(jié)果：
　　1、

6、人體心臟的形態(tài)學(xué)觀察：（1）HE染色：三組均有心肌肥大，冠脈有不同程度的粥樣硬化性狹窄，酒精組及精神應(yīng)激組的心肌纖維呈波浪狀彎曲，心肌纖維斷裂多于對照組；（2）P/VB染色：對照組內(nèi)彈力纖維無明顯脆性斷裂，酒精組及精神應(yīng)激組內(nèi)彈力纖維中脆性斷裂較多見。
　　2、人體心臟標(biāo)本肥大細(xì)胞類胰蛋白酶的免疫組化檢測結(jié)果顯示：（1）精神應(yīng)激組、酒精組的冠脈外膜周圍肥大細(xì)胞數(shù)量均明顯多于對照組（P<0.05,P<0.05），兩組之間無顯著差異（

7、P>0.05）。而在心肌間質(zhì)中，兩組與對照組之間的肥大細(xì)胞數(shù)量無明顯差異（P>0.05）。（2）不論在心肌間質(zhì)還是冠脈外膜周圍，精神應(yīng)激組、酒精組的肥大細(xì)胞脫顆粒率均明顯多于對照組（P<0.01,P<0.01），酒精組與神經(jīng)應(yīng)激組之間無顯著差異（P>0.05）。
　　3、人體心臟標(biāo)本腎素及AT1R的免疫組化檢測:腎素及AT1R在對照組的冠脈及心肌間質(zhì)中表達(dá)豐富，而在酒精組及精神應(yīng)激組中，大部分病例表達(dá)缺失。經(jīng)統(tǒng)計(jì)：①對照組腎素表達(dá)

8、量明顯多于酒精組與精神應(yīng)激組（P<0.05,P<0.01）；②對照組AT1R的表達(dá)量明顯多于酒精組與精神應(yīng)激組（P<0.01,P<0.01）；③酒精組與神經(jīng)應(yīng)激組之間的腎素、AT1R的表達(dá)無顯著差異（P>0.05,P>0.05）。
　　4、Pearson相關(guān)分析:表明冠脈外膜周圍肥大細(xì)胞的脫顆粒率越高，冠脈中腎素及AT1R的含量越低，存在顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系（P<0.01,P<0.01）。
　　5、用APOE基因缺陷小鼠構(gòu)建急性酒

9、精中毒模型的心臟標(biāo)本：（1）進(jìn)行麗春紅S/維多利亞藍(lán)復(fù)合染色（P/VB特殊染色），對照組小鼠冠脈彈力纖維呈整齊波浪狀彎曲，急性灌酒組87.5％的小鼠冠脈的彈力纖維被拉直；（2）進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析得知，急性灌酒組的肥大細(xì)胞總數(shù)及肥大細(xì)胞脫顆粒率均較對照組多（P<0.01,P<0.01）；（3）腎素及AT1R在對照組冠脈及心臟小血管內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)量多于急性灌酒組。
　　結(jié)論：
　　1、心臟中肥大細(xì)胞的數(shù)量增多，尤其

10、是其活化率的增高，很可能是SCD發(fā)生過程中的一個重要環(huán)節(jié)。
　　2、腎素及AT1R在SCD的發(fā)生過程中被大量消耗，提示肥大細(xì)胞可能是通過激活心臟局部的RAS系統(tǒng)來促進(jìn)SCD的發(fā)生。
　　3、肥大細(xì)胞數(shù)量、脫顆粒率的增多以及腎素、AT1R的消耗均以冠脈更為顯著，因此冠脈可能是SCD發(fā)生發(fā)展過程中的關(guān)鍵部位。
　　4、酗酒、爭斗等不同應(yīng)激，可能都通過肥大細(xì)胞脫顆粒，進(jìn)而啟動局部RAS系統(tǒng)來誘發(fā)SCD發(fā)生的，應(yīng)激的來源可能并