TGF-β1聯(lián)合CTGF體外干預(yù)誘導(dǎo)BMSCs向軟骨細(xì)胞分化的研究.pdf

1、目的：探討在體外TGF-β1、CTGF及兩者聯(lián)合誘導(dǎo)BMSCs向軟骨細(xì)胞分化的能力。在體外建立適合BMSCs向軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化的條件，為軟骨組織工程種子細(xì)胞—BMSCs的研究提供理論依據(jù)。
　　方法：1.采用紅細(xì)胞裂解液的方法分離提取新西蘭大耳兔的BMSCs，在體外進(jìn)行培養(yǎng)并傳代。用倒置顯微鏡下觀察原代及2-5代BMSCs的形態(tài)；采用H&E染色及電子顯微鏡觀察第4代BMSCs的形態(tài)；用細(xì)胞免疫組化法及流式細(xì)胞檢測技術(shù)對第4代BMS

2、Cs進(jìn)行鑒定，檢測其細(xì)胞表面抗原CD34、CD44及CD29的表達(dá)情況。并用臺盼藍(lán)染色的方法測定BMSCs活力；用MTT法檢測原代及2-6代BMSCs的增殖情況。2.用TGF-β1、CTGF及兩者聯(lián)合誘導(dǎo)第4代BMSCs細(xì)胞向軟骨細(xì)胞定向分化。并采用倒置顯微鏡及H&E染色觀察其形態(tài)；用阿利新藍(lán)染色法及甲苯氨藍(lán)染色法檢測GAG的表達(dá)。3.實驗結(jié)果計量資料以(X±S)表示，采用數(shù)據(jù)軟件SPSS13.0分析，多組比較采用方差分析，若不滿足方差

3、分析條件，進(jìn)行秩轉(zhuǎn)換后再進(jìn)行方差分析。假設(shè)α=0.05，若P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：①用紅細(xì)胞裂解液的方法能快速分離提取兔BMSCs并能較好的傳代培養(yǎng)。②免疫組化法及流式細(xì)胞儀法對第4代BMSCs鑒定結(jié)果為：BMSCs的表面抗原CD29、CD44陽性表達(dá)，而表面抗原CD34陰性表達(dá)。③生長曲線顯示原代及2-6代BMSCs生長旺盛，其中第4代生長最旺盛。④甲苯胺藍(lán)染色、阿利新藍(lán)染色檢測實驗組中GAG均有不同程度的