脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、[目的]：研究人脂肪干細(xì)胞(humanAdipose-derivedStemCells，ADSCs)在體外單層培養(yǎng)條件下誘導(dǎo)為軟骨細(xì)胞可行性；研究脂肪干細(xì)胞與脫鈣骨復(fù)合物在三維誘導(dǎo)培養(yǎng)條件下，回植到裸鼠皮下環(huán)境中組織形成情況，為軟骨組織工程臨床應(yīng)用提供初步實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。 [材料與方法]:對(duì)脂肪抽吸物中分離的間質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)誘導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)在兩種條件下進(jìn)行，單層誘導(dǎo)培養(yǎng)和三維誘導(dǎo)培養(yǎng)(支架為脫鈣骨)，每種實(shí)驗(yàn)條件各設(shè)誘導(dǎo)組和未誘導(dǎo)

2、組，誘導(dǎo)組用含有TGF-β1、地塞米松等特定誘導(dǎo)培養(yǎng)液進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，對(duì)照組的培養(yǎng)液為含10﹪FBS的DMEM。每天光鏡下觀察單層誘導(dǎo)和未誘導(dǎo)的脂肪干細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變，培養(yǎng)三天后免疫組化、原位雜交和RT-PCR等方法檢測(cè)膠原和蛋白多糖的體外表達(dá)情況；脂肪干細(xì)胞－脫鈣骨復(fù)合物誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)組和未誘導(dǎo)對(duì)照組體外培養(yǎng)6天，回植到裸鼠皮下，分別于2、4、6、8、10周取材。石蠟切片免疫組化、Masson's、Alician's染色進(jìn)行膠原和蛋白多糖表達(dá)

3、、分布鑒定。 [結(jié)果]:未誘導(dǎo)的脂肪干細(xì)胞呈克隆性生長，細(xì)胞形態(tài)呈長梭形；誘導(dǎo)后細(xì)胞逐漸呈三角形、多角形等軟骨細(xì)胞樣形態(tài)。免疫組化、原位雜交顯示誘導(dǎo)后ADSCs表達(dá)Ⅱ型膠原，但同時(shí)也觀察到Ⅰ、Ⅲ型膠原表達(dá)；RT-PCR證實(shí)誘導(dǎo)ADSCs表達(dá)aggrecan、Ⅱ型膠原mRNA，同時(shí)表達(dá)Ⅰ、Ⅲ、Ⅹ、Ⅺ型膠原mRNA，未見Ⅸ型膠原mRNA表達(dá)；未誘導(dǎo)ADSCs不表達(dá)aggrecan、Ⅱ型膠原mRNA。三維誘導(dǎo)后回植皮下2、4、6、8、

4、10周取材、切片，實(shí)驗(yàn)組免疫組化顯示表達(dá)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型膠原；Masson's、Alician's染色可見材料內(nèi)的膠原分泌旺盛，有酸-1-性粘多糖沉積，但組織學(xué)觀察特征性的軟骨組織結(jié)構(gòu)形成不明顯；對(duì)照組未見Ⅱ型膠原及酸性粘≥糖沉積。 [結(jié)論]:脂肪干細(xì)胞單層誘導(dǎo)培養(yǎng)條件下，能分泌軟骨細(xì)胞特征性細(xì)胞外基質(zhì)-Ⅱ型膠原、aggrecan等，脂肪干細(xì)胞可作為軟骨組織工程種子細(xì)胞的重要來源；誘導(dǎo)后回植的細(xì)胞－脫鈣骨復(fù)合物可表達(dá)特異的軟骨基質(zhì)－