PDGF-B、BMP-7促進(jìn)BMSCs向軟骨細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:探討原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體外分化為軟骨細(xì)胞的條件。骨髓中提取原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,體外利用BMP-7、PDGF-B誘導(dǎo)具有多分化潛能的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向向軟骨細(xì)胞分化,比較BMP-7、PDGF-B及聯(lián)合時(shí)對其誘導(dǎo)分化的促進(jìn)作用。
　　方法:(1)無菌條件下收集健康、年輕患者因外傷截肢術(shù)后廢棄骨骼中骨髓,4℃冷藏備用。(2)離心管內(nèi)使用配制密度為1.073g/ml的Percoll分離液與稀釋的骨髓分層放置,在1800g條件

2、下低溫離心機(jī)離心30分鐘;吸取白霧細(xì)胞層與D-Hanks液混合并稀釋三倍后1000g條件下低溫離心10分鐘,重復(fù)兩次。(3)離心重懸細(xì)胞并取細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),按比例接種細(xì)胞,用含15％FBS的LG-DMEM培養(yǎng)基在CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)擴(kuò)增原代細(xì)胞,并行細(xì)胞形態(tài)學(xué)鑒定及流式檢測細(xì)胞表面抗原。(4)MTT檢測細(xì)胞增殖率,確定細(xì)胞因子使用濃度,進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分組。(5)誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化,進(jìn)行細(xì)胞進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色、Western blot及

3、RT-PCR檢測Ⅱ型膠原蛋白含量及mRNA表達(dá)量,并予以統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:(1)成功獲得原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增;(2)行光鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)鑒定及流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面抗原,符合間充質(zhì)干細(xì)胞的特點(diǎn);(3)不同濃度下MTT檢測間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖效率,以BMP-7200ng/ml及PDGF-B75ng/ml濃度時(shí)細(xì)胞增殖活躍程度最明顯;(4)在BMP-7、PDGF-B的參與下,骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞定向分化;PDGF