體外誘導人羊水來源間充質干細胞向軟骨細胞分化的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、研究目的
　　 探討分離、提純和擴增孕中期羊水來源間充質干細胞(AF-MSCs)的方法,以及體外誘導AF-MSCs向軟骨細胞分化的可能性。
　　 研究方法
　　 機械手段挑取孕中期人羊水細胞培養(yǎng)體系中的MSCs集落,培養(yǎng)擴增后,通過流式細胞術對表面抗原表達情況進行鑒定,并通過RT-PCR檢測多能性基因Oct4及Nanog的表達情況。取第3代AF-MSCs,經(jīng)TGF-β1、IGF-1、地塞米松等生長因子向軟骨細胞方

2、向誘導分化。倒置相差顯微鏡觀察誘導后細胞形態(tài)的變化。誘導3周后,免疫熒光染色及RT-PCR,分別檢測軟骨特異性基質CollengonⅡ、Aggrecan、Chondromudulin-1、S100的蛋白及其基因的表達情況。
　　 研究結果
　　 機械手段分離出的AF-MSCs為CD105、CDl66陽性,CD29若陽性,CD34、CD45陰性,符合MSCs特點。AF-MSCs表達多能性基因Oct4,但不表達Nanog。誘

3、導2周后,細胞開始呈多角形樣改變;誘導后3周時,大部分細胞由長梭形轉變?yōu)槎嘟切?。免疫熒光及RT-PCR檢測顯示誘導后的AF-MSCs軟骨特異性基質CollengonⅡ、Aggrecan、Chondromudulin-1和S100的蛋白和基因呈陽性表達,而未經(jīng)誘導培養(yǎng)的AF-MSCs呈陰性表達。
　　 研究結論
　　 機械分離法可有效獲得孕中期羊水來源間充質干細胞,經(jīng)TGF-β1,IGF-1,地塞米松聯(lián)合誘導3周后,AF-

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