Wnt-β-catenin信號通路相關(guān)蛋白在食管癌細(xì)胞株的表達(dá)及研究.pdf

1、目的：通過蛋白質(zhì)組學(xué)研究比較食管癌發(fā)生發(fā)展過程中的差異蛋白，分析這些差異蛋白生物學(xué)信息，并采用體外培養(yǎng)細(xì)胞株探討Wnt經(jīng)典信號通路中Wnt2, GSK3β,β-catenin三個(gè)關(guān)鍵蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌及正常食管上皮組織在體外的表達(dá)及意義。
　　方法：采用同位素標(biāo)記相對和絕對定量技術(shù)（iTRAQ）對新鮮的食管癌和癌旁組織分別標(biāo)記，通過比較二者的差異蛋白分析其生物學(xué)信息并篩選重要的信號傳導(dǎo)通路；培養(yǎng)正常食管上皮細(xì)胞株HEEC和食管癌

2、細(xì)胞株EC109，通過劃痕實(shí)驗(yàn)對比二株細(xì)胞株的生物侵襲性，用逆轉(zhuǎn)錄PCR及蛋白印跡方法分別在基因水平和蛋白水平檢測Wnt2, GSK3β,β-catenin在HEEC及EC109細(xì)胞株中的表達(dá)。
　　結(jié)果：（1）采用iTRAQ方法檢測得到食管癌與癌旁組織共有431個(gè)差異蛋白，共同上調(diào)蛋白和共同下調(diào)蛋白數(shù)量分別為72和57。（2）用劃痕實(shí)驗(yàn)方法測得食管癌細(xì)胞株生物侵襲性比正常食管上皮細(xì)胞株強(qiáng)。（3）用逆轉(zhuǎn)錄PCR實(shí)驗(yàn)方法檢測的Wnt

3、2, GSK3β,β-catenin結(jié)果與蛋白印跡實(shí)驗(yàn)方法檢測的結(jié)果相一致。（4）Wnt2在食管鱗狀細(xì)胞癌株中呈高表達(dá)。GSK3β在正常食管上皮細(xì)胞株中表達(dá)高于食管鱗狀細(xì)胞癌株，而β-catenin在正常食管上皮細(xì)胞株中高表達(dá)。
　　結(jié)論：iTRAQ技術(shù)為食管癌篩選出大量的差異蛋白，為臨床尋找食管癌生物標(biāo)記物提供了可靠的資源；Wnt經(jīng)典信號通路中 Wnt2與GSK3β均參與了食管鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生與發(fā)展過程。β-catenin對食管