多西他賽、貝伐單抗和西妥昔單抗不同給藥順序?qū)RAS野生型肺癌荷瘤小鼠治療效果的研究.pdf

1、背景與目的：肺癌是全球范圍內(nèi)主要的癌癥死亡原因，發(fā)病率和死亡率均呈明顯增高趨勢(shì)。依據(jù)生物學(xué)行為的差異，臨床中通常將肺癌廣泛的分為非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）和小細(xì)胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）兩大類(lèi)，其中以NSCLC占大多數(shù)，約占所有肺癌病例的80％～85%。多數(shù)NSCLC患者在就診時(shí)腫瘤已經(jīng)發(fā)生局部進(jìn)展或者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，對(duì)于此類(lèi)患者早期多采用化療進(jìn)行治療

2、，但研究表明化療并不能夠改變大多數(shù)肺癌患者的遠(yuǎn)期治療結(jié)局，在化療上的獲益程度已經(jīng)最大化，換句話(huà)說(shuō)，化療的療效已經(jīng)達(dá)到了一個(gè)平臺(tái)期，隨著人們對(duì)腫瘤分子生物學(xué)和基因水平認(rèn)識(shí)的不斷深入，分子靶向治療的研究和臨床應(yīng)用已經(jīng)成為了人們關(guān)注的熱點(diǎn)之一。
　　近期研究顯示酪氨酸激酶抑制劑（tyrosine kinase inhibitor，TKI）與細(xì)胞毒藥物以不同的給藥順序應(yīng)用會(huì)對(duì)抗腫瘤效果產(chǎn)生明確的影響，由此引起人們對(duì)于細(xì)胞毒藥物與分子靶向藥

3、物最佳應(yīng)用順序的關(guān)注。西妥昔單抗聯(lián)合化療作為晚期NSCLC患者一線(xiàn)治療的臨床試驗(yàn)( FLEX)表明，在化療的基礎(chǔ)上聯(lián)合西妥昔單抗比單用化療起到更好的延長(zhǎng)總生存期（overall survival，OS）的治療效果。在晚期NSCLC治療領(lǐng)域，多項(xiàng)臨研究(E4599、AVAIL、SAIL等)都證實(shí)，在化療的基礎(chǔ)上聯(lián)合貝伐珠單抗可以延長(zhǎng)晚期NSCLC患者的OS以及患者的無(wú)進(jìn)展生存期（progression-free survival，PFS）

4、。但直到目前為止，關(guān)于西妥昔單抗、貝伐單抗與細(xì)胞毒藥物給藥順序的研究仍然較少。目前也尚未見(jiàn)國(guó)內(nèi)外有類(lèi)似研究的報(bào)告。
　　本課題為觀察多西他賽、西妥昔單抗和貝伐單抗給藥順序的基礎(chǔ)研究，通過(guò)選取肺癌細(xì)胞株KRAS野生型 H1299細(xì)胞荷瘤小鼠作為研究對(duì)象，分別以不同順序給予多西他賽、西妥昔單抗和貝伐單抗，治療結(jié)束后處死小鼠，將移植瘤剝離并測(cè)量腫瘤體積，檢測(cè)腫瘤組織相關(guān)蛋白情況，觀察多西他賽聯(lián)合西妥昔單抗序貫貝伐單抗與多西他賽聯(lián)合貝伐單

5、抗序貫西妥昔單抗對(duì)KRAS野生型肺癌荷瘤小鼠的抗腫瘤效果，確定西妥昔單抗與貝伐單抗的最佳應(yīng)用順序，為臨床合理用藥提供理論依據(jù)。
　　方法：選擇KRAS野生型 H1299細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)、傳代，并以一定數(shù)量的細(xì)胞進(jìn)行種瘤。待小鼠皮下腫瘤達(dá)到約100~200mm3進(jìn)行抗腫瘤治療。按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)將小鼠分為8組，即對(duì)照組、單藥組（TXT、C225、Bev）、兩藥聯(lián)合組(Bev+TXT、C225+TXT)和兩藥聯(lián)合、單藥序貫組（Bev+TXT→C2

6、25、C225+TXT→Bev），治療結(jié)束后測(cè)量瘤體體積，并應(yīng)用免疫組化法測(cè)定微血管密度（MVD）、Western Blot法測(cè)定EGFR、VEGF、Bax、Bcl-2等相關(guān)蛋白含量。
　　結(jié)果：1.多西他賽、西妥昔單抗和貝伐單抗不同用藥順序?qū)RAS野生型肺癌H1299細(xì)胞裸鼠移植瘤體積的影響：各實(shí)驗(yàn)組對(duì)比空白對(duì)照組對(duì)移植瘤體積均有一定抑制作用（P<0.001）。其中以單藥C225組、C225+TXT組、C225+TXT→Bev

7、組作用相對(duì)明顯。單藥C225組對(duì)移植瘤的抑制作用顯著高于單藥TXT（P=0.037）和單藥Bev（P=0.01），均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。然而單藥C225組與C225+TXT組、C225+TXT→Bev組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。同時(shí)兩藥聯(lián)合組（Bev+TXT、C225+TXT）與序貫組（C225+TXT序貫Bev、Bev+TXT序貫C225）以及序貫組組間對(duì)比也均無(wú)明顯差異（P>0.05）。
　　2.免疫組化檢測(cè)微血管密度（M

8、VD）：各實(shí)驗(yàn)組中以單藥Bev組微血管密度減少最為明顯，但與各組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　3.多西他賽、西妥昔單抗和貝伐單抗不同順序應(yīng)用于肺腺癌 H1299荷瘤小鼠后，各實(shí)驗(yàn)組較空白對(duì)照組VEGF均有不同程度升高,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。各實(shí)驗(yàn)組Bcl-2蛋白的表達(dá)均有所升高，且均顯著降低了Bax蛋白的表達(dá)， Bcl-2/Bax的比值降低，說(shuō)明多西他賽、西妥昔單抗和貝伐單抗不同應(yīng)用順序均不同程度的抑制血管生成，并通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞