染料木黃酮對宿主和HCMV編碼的IE基因相關microRNA表達的影響.pdf

1、目的：⑴應用染料木黃酮（genistein，Gen）作藥物，探討在人巨細胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）感染人星形膠質細胞（human astrocyte，AS）中，Gen對HCMVIE基因的作用及對與主要即刻早期啟動子（major immediate early promoter，MIEP）結合的組蛋白H3乙?；挠绊?。⑵探討宿主和HCMV的microRNA（miRNA）在Gen抗HCMV感染AS中的作用

2、。
　　方法：①ASs由人神經干細胞（human neural stem cell，NSC）分化而來，HCMV于人胚肺中（human embryonic lung fibroblast，HELFs）擴增，TCID50法測其滴度。②Cell counting kit-8（CCK-8)實驗測不同藥物濃度下的細胞活性與細胞毒性，以選出合適的藥物濃度。③RT-qPCR測IE1、IE2基因及細胞miRNA200家族、病毒miR-UL112的

3、表達變化。④染色質免疫共沉淀（Chromatin immunoprecipitation assay，ChIP）檢測與HCMV MIEP結合的組蛋白H3乙?；母淖?。
　　結果：⑴CCK-8結果顯示，10μmol/L G+V組的cck-8值均高于同時間組的V組。⑵形態(tài)學觀察，G組與對照組無明顯差別，V組細胞病變明顯，V+G組與G+V組的細胞狀態(tài)相對V組要好，先加藥的G+V組的細胞狀態(tài)相對后加藥的V+G組要好。⑶RT-qPCR結果表

4、明，同V組相比，10μmol/L G+V與V+G組會降低IE1、IE2基因的表達。⑷RT-qPCR結果表明，同V組相比，10μmol/L G+V與V+G組能逆轉部分hsa-miR-200 miRNA家族及miR-UL112的下降。⑸ChIP結果顯示，10μmol/L G+V與V+G組會降低MIEP結合的組蛋白H3的乙?；?br>　　結論：①10μmol/L的Gen能一定程度抑制HCMV感染AS所致的增殖異常。②Gen能一定程度抑制IE