mTOR抑制劑依維莫司聯(lián)合紫杉醇對(duì)耐阿霉素乳腺癌細(xì)胞株MCF-7-ADR的增殖抑制作用及分子機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　化療藥物抵抗導(dǎo)致乳腺癌患者化療失敗已成為一個(gè)問(wèn)題。研究發(fā)現(xiàn)， PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路失調(diào)是機(jī)體產(chǎn)生耐藥的原因之一，而雷帕霉素靶蛋白mTOR基因是該通路的關(guān)鍵基因。本研究旨在探討紫杉醇聯(lián)合mTOR抑制劑依維莫司對(duì)MCF-7/ADR耐藥細(xì)胞株的治療效果，并探討其相關(guān)作用機(jī)制。
　　方法
　　乳腺癌耐阿霉素細(xì)胞株MCF-7/ADR細(xì)胞培養(yǎng)于含10％胎牛血清、1000ng/ml阿霉素的RPMI1640培

2、養(yǎng)基中，給予紫杉醇和依維莫司干預(yù)，1、MTT法分別檢測(cè)紫杉醇和依維莫司作用細(xì)胞48h的IC50，根據(jù)IC50結(jié)果設(shè)置紫杉醇和依維莫司的濃度， MTT法檢測(cè)聯(lián)合用藥的效果；2、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各用藥組作用于MCF-7/ADR細(xì)胞48h后細(xì)胞凋亡率；3、Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞中PI3K、mTOR、4EBP1、p-pI3K、p-AKT、p-mTOR和p-4EBP1蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果
　　1、MTT結(jié)果表明，紫杉

3、醇和依維莫司抑制細(xì)胞增殖具有劑量依賴性，其紫杉醇IC50為9.59μg/mL，依維莫司IC50為32.582μg/mL。紫杉醇和依維莫司聯(lián)合時(shí)抗增殖作用大于紫杉醇或依維莫司單獨(dú)作用，組合指數(shù)均小于0.9。
　　2、用藥組MCF-7/ADR細(xì)胞出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象，凋亡率與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（(P＜0.05）。紫杉醇聯(lián)合依維莫司處理細(xì)胞，細(xì)胞出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象最明顯，凋亡率與對(duì)照組、紫杉醇組、依維莫司組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.0

4、5）,紫杉醇和依維莫司聯(lián)合作用與單獨(dú)用紫杉醇處理相比，在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡時(shí)有協(xié)同作用。
　　3、Western blot分析表明，紫杉醇和依維莫司處理導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)PI3K、mTOR、4EBP1、p-pI3K、p-AKT、p-mTOR和p-4EBP1的表達(dá)水平下降。與單獨(dú)用藥相比，聯(lián)合用藥下降水平明顯較單獨(dú)用藥劇烈，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論
　　1．依維莫司能夠增強(qiáng)紫杉醇對(duì)MCF-7/ADR細(xì)胞的影響，抑