自噬調(diào)控內(nèi)皮祖細(xì)胞uPA表達(dá)和機(jī)制的研究.pdf

1、目的：探討低氧條件下，自噬調(diào)控內(nèi)皮祖細(xì)胞 uPA表達(dá)的影響；探討低氧條件下，自噬內(nèi)皮祖細(xì)胞uPA表達(dá)的分子機(jī)制。
　　方法：1.使用密度梯度離心法提取SD大鼠骨髓中的單個(gè)核細(xì)胞（BMMNCs），運(yùn)用差速貼壁法以及EGM-2MV誘導(dǎo)分化培養(yǎng)出EPCs，于體外培養(yǎng)15~30天，定期觀察EPCs的細(xì)胞形態(tài)變化，使用乙酰低密度脂蛋白、荊豆凝集素吞噬實(shí)驗(yàn)以及流式細(xì)胞法鑒定細(xì)胞特征性表型，血管生成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)EPCs的成血管能力；2.低氧條件下采

2、用慢病毒感染上調(diào)和下調(diào)自噬關(guān)鍵基因ATG-5，熒光顯微鏡觀察感染效率，RT-PCR驗(yàn)證ATG-5的表達(dá)水平，Western-blot檢測(cè)EPC中uPA的形成；3.低氧條件下上調(diào)和下調(diào)自噬關(guān)鍵基因ATG-5后，Western-blot檢測(cè)mTOR-S6K信號(hào)通路磷酸化水平的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：1.提取獲得SD大鼠BMNCs并經(jīng)體EGM-2MV誘導(dǎo)培養(yǎng)后，培養(yǎng)細(xì)胞表達(dá)相應(yīng)的內(nèi)皮細(xì)胞表面抗原，如CD34、CD133以及VEGFR-2，

3、可以結(jié)合UEA-1并吞噬Dil-acLDL，Martrigel成血管實(shí)驗(yàn)顯示其具備成血管能力；2.低氧條件下，上調(diào)ATG-5的表達(dá)能夠顯著增加uPA的表達(dá)（p<0.05），而下調(diào)ATG-5表達(dá)則能夠降低uPA的表達(dá)；3.低氧條件下，上調(diào)ATG-5的表達(dá)能夠顯著增加m-TOR和S6K的磷酸化（p<0.05），而下調(diào)ATG-5的表達(dá)能夠降低m-TOR和S6K的磷酸化（p<0.05）。
　　結(jié)論：低氧條件下上調(diào)和下調(diào)自噬關(guān)鍵基因ATG-