轉錄因子E2-2調控自噬影響內皮祖細胞增殖的研究.pdf

1、內皮祖細胞(Endothelial progenitor cells，EPCs)作為內皮細胞(Endothelial cells，ECs)主要來源，在受損血管內皮的修復中發(fā)揮重要作用。近年有研究表明，轉錄因子E2-2可抑制EPCs的增殖。E2-2是一種“螺旋-環(huán)-螺旋”轉錄調控因子，屬于E蛋白家族，在真核細胞內廣泛表達。但E2-2對EPCs增殖能力的影響，以及調控EPCs增殖的內在機制還不十分清楚。自噬作為細胞的基本生命活動，對維持細胞

2、生理穩(wěn)定有重要作用。有研究顯示，E2-2能夠通過Wnt/β-catenin通路抑制腫瘤細胞自噬，調控腫瘤細胞增殖。E2-2能否通過調控自噬水平從而實現(xiàn)對EPCs增殖的調控是本研究涉及的切入點。本研究通過實驗觀察E2-2對EPCs增殖的影響，以及明確該影響是否通過調控自噬水平實現(xiàn)的，從而為受損血管內皮修復和冠心病治療新策略提供新的理論依據(jù)。
　　目的:
　　明確E2-2通過調控自噬影響EPCs增殖，并初步探討其中機制。

3、　　方法:
　　小鼠脾源性EPCs的分離、培養(yǎng)、鑒定。過表達和干擾E2-2后，檢測EPCs的增殖與自噬水平。自噬抑制劑氯喹(Chloroquine，CQ)不同濃度不同時間處理EPCs。干擾E2-2后加入CQ與只干擾E2-2不加CQ組對比EPCs增殖與自噬水平。干擾E2-2后，檢測EPCs內ATG7表達水平。共同轉染干擾E2-2和ATG7后，檢測自噬標志蛋白的變化情況。CCK-8試驗用于檢測EPCs增殖情況，轉染Ad-mRFP-GF

4、P-LC3后，共聚焦顯微鏡下觀察EPCs內自噬小體和自噬溶酶體。Western blotting實驗檢測蛋白表達情況，PCR、Q-PCR檢測mRNA表達。
　　結果:
　　1.過表達E2-2能夠抑制EPCs增殖能力，下調EPCs自噬水平;
　　2.干擾E2-2能夠增加EPCs增殖能力，上調自噬水平;
　　3.加入CQ能夠阻斷干擾E2-2引起的EPCs自噬和增殖上調;
　　4.干擾E2-2后，ATG7基因表達