脊髓損傷大鼠觸液神經(jīng)元與內源性神經(jīng)干細胞相關性研究.pdf

1、目的:通過探索成年大鼠脊髓損傷前后接觸腦脊液神經(jīng)元（ spinal fluid-contacting neurons，CSF-CNs）、內源性神經(jīng)干細胞（Endogenous Neural Stem Cells，ENSCs），兩者數(shù)量、分布情況，分析兩種細胞之間的相關性，開辟“通過CSF-CNs的作用誘導受損脊髓ENSCs增殖分化從而修復脊髓功能”這一治療途徑。
　　方法:成年健康 SD大鼠60只，由貴州醫(yī)科大學動物實驗中提供。隨

2、機分為對照組20只（n=20）和脊髓損傷組40只（n=40）。在大鼠腦立體坐標定位后，對兩組大鼠的單側側腦室進行注射。均一次性注射霍亂毒素亞單位B結合辣根過氧化酶（Cholera toxin B subunit conjugated horseradish peroxidase，CB-HRP）3μg，注射后繼續(xù)飼養(yǎng)大鼠2d。觀察大鼠生命體征并評價運動情況。大鼠全麻下，采用鉗夾方式建立大鼠脊髓損傷動物模型，根據(jù)BBB評分標準評價受傷大鼠的

3、運動功能，并繼續(xù)飼養(yǎng)大鼠。在術后1d、3d、7d、14d、28d時間點，同時采用灌注處死兩組大鼠，然后進行損傷脊髓組織及腦組織取材并制作標本。石蠟包埋、切片，加一抗、熒光二抗染色，行CB-HRP和 Nestin免疫熒光雙標。在熒光顯微鏡下應用數(shù)字照相技術分析圖像中熒光光密度值，采用SPSS21.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計，從而得到CSF-CNs與 ENSCs的數(shù)量、分布情況變化，采用再分析二者之間的相關性。
　　結果：CSF-C

4、Ns與ENSCs在部位上具有一定的相同來源。大鼠脊髓、腦組織中CSF-CNs的數(shù)量在脊髓損傷前后有明顯變化，即損傷以前相對較少，損傷后明顯增加，兩者比較具有統(tǒng)計學意義；大鼠脊髓、腦組織中內源性神經(jīng)干細胞的數(shù)量在脊髓損傷后有明顯變化，同樣為損傷以前相對較少，損傷后明顯增加，兩者具有統(tǒng)計學意義；在脊髓損傷組大鼠的 CB-HRP與 Nestin雙標神經(jīng)元圖像中，脊髓中央管附近和側腦室附近觀測到紅、綠色雙標的有核細胞，呈雙極或多極神經(jīng)元形態(tài)，分