bFGF預(yù)處理對大鼠腦缺血-再灌注損傷的神經(jīng)保護(hù)作用和內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞增殖、分化的影響.pdf

1、目的:1.建立大鼠腦缺血/再灌注模型，探討堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)預(yù)處理對腦缺血再灌注損傷(IR)的神經(jīng)保護(hù)作用。2.探究bFGF預(yù)處理對腦缺血/再灌注損傷(IR)大鼠神經(jīng)干細(xì)胞增殖、分化的影響，為臨床早期應(yīng)用bFGF預(yù)防和治療缺血性腦血管病提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:90只健康雄性SD大鼠，隨機(jī)分成假手術(shù)組、腦缺血/再灌注對照組、bFGF預(yù)處理組。在制備腦缺血/再灌注模型前向bFGF預(yù)處理組大鼠側(cè)腦室注射含有50u

2、g/ml bFGF的溶液5ul，向假手術(shù)組和缺血/再灌注對照組大鼠側(cè)腦室注射等體積的無菌生理鹽水，注射2小時后建立腦缺血/再灌注動物模型。分別于術(shù)后1天、3天、7天進(jìn)行mNSS神經(jīng)功能評分、TTC染色觀察梗死灶面積;術(shù)后1天采用甲苯胺藍(lán)染色和TUNEL染色技術(shù)觀察缺血/再灌注區(qū)域神經(jīng)細(xì)胞受損程度和凋亡情況;免疫熒光單標(biāo)染色統(tǒng)計BrdU陽性細(xì)胞數(shù)目;免疫熒光雙標(biāo)染色觀察BrdU/DCX、Brdu/NeuN和Brdu/GFAP陽性細(xì)胞的表達(dá)

3、情況。
　　結(jié)果:1.mNSS結(jié)果顯示:假手術(shù)組動物未出現(xiàn)神經(jīng)功能損傷癥狀。缺血組和bFGF預(yù)處理組動物均出現(xiàn)缺血側(cè)Horner征及對側(cè)神經(jīng)功能缺損癥狀，且在術(shù)后第1天損傷最嚴(yán)重，術(shù)后第3天和第7天有自發(fā)恢復(fù)的趨勢。與缺血組相比，bFGF預(yù)處理組大鼠在術(shù)后不同時間點(diǎn)的mNSS均明顯減輕。
　　2.TTC染色觀察腦缺血再灌注損傷后的梗死體積，假手術(shù)組沒有發(fā)現(xiàn)梗死灶，組織呈現(xiàn)鮮紅色;缺血組和bFGF預(yù)處理組大鼠在所觀察的3個時間

4、點(diǎn)均出現(xiàn)明顯的蒼白色梗死灶，術(shù)后第1天梗死灶面積最大，隨后有減小的趨勢。與缺血組相比，bFGF預(yù)處理組大鼠在各個時間點(diǎn)的梗死灶面積均顯著減小。
　　3.甲苯胺藍(lán)染色結(jié)果顯示:假手術(shù)組未見神經(jīng)元損傷;而缺血組的損傷側(cè)大腦皮質(zhì)、紋狀體和海馬區(qū)出現(xiàn)大面積的神經(jīng)元壞死和凋亡，受損區(qū)神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量顯著減少。與缺血組相比，bFGF預(yù)處理組也出現(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞核固縮和排列錯亂現(xiàn)象，但神經(jīng)細(xì)胞的損傷變性程度明顯減輕，細(xì)胞丟失情況明顯減少。
　　4.

5、TUNEL染色結(jié)果顯示:術(shù)后1天，假手術(shù)組皮質(zhì)和紋狀體幾乎無TUNEL陽性細(xì)胞;但缺血組和bFGF預(yù)處理組的缺血側(cè)皮質(zhì)和紋狀體中均可見大量的TUNEL陽性細(xì)胞。與缺血組相比，bFGF預(yù)處理組TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)量明顯減少。
　　5.BrdU免疫熒光染色統(tǒng)計各組大鼠缺血側(cè)半球（左側(cè)）SVZ區(qū)、紋狀體和皮質(zhì)新增殖細(xì)胞數(shù)目。結(jié)果顯示假手術(shù)組僅在SVZ區(qū)有少量的BrdU陽性細(xì)胞，紋狀體和皮質(zhì)中未見BrdU陽性信號。缺血組在三個區(qū)域都有Br

6、dU陽性信號，且顯著高于對照組。與缺血組相比，bFGF預(yù)處理組大鼠缺血側(cè)的SVZ區(qū)、紋狀體和皮質(zhì)中BrdU陽性細(xì)胞的數(shù)目均顯著增加。
　　6.免疫熒光雙標(biāo)染色結(jié)果:(1)在術(shù)后第7天，大部分BrdU陽性細(xì)胞同時表達(dá)DCX，BrdU/DCX陽性細(xì)胞數(shù)約占BrdU細(xì)胞總數(shù)的70％～80％。在缺血側(cè)SVZ區(qū)，假手術(shù)的組BrdU/DCX陽性細(xì)胞數(shù)最少;缺血組BrdU/DCX陽性細(xì)胞數(shù)為假手術(shù)組1.9倍。與缺血組相比，bFGF預(yù)處理組Brd

7、U/DCX陽性細(xì)胞數(shù)顯著增多。在缺血側(cè)紋狀體和皮質(zhì)中，假手術(shù)組未見BrdU/DCX陽性信號;缺血組和bFGF預(yù)處理組均發(fā)現(xiàn)BrdU/DCX陽性細(xì)胞，且bFGF預(yù)處理組明顯多于缺血組。(2)缺血組和bFGF預(yù)處理組大鼠的缺血側(cè)SVZ區(qū)、紋狀體和皮質(zhì)都可見BrdU/GFAP陽性信號表達(dá)，BrdU/GFAP陽性細(xì)胞數(shù)約占BrdU陽性細(xì)胞總數(shù)的3％～5％。而假手術(shù)組BrdU/GFAP陽性細(xì)胞只存在于SVZ區(qū)，其他區(qū)未發(fā)現(xiàn)。通過實(shí)驗(yàn)組間比較發(fā)現(xiàn):

8、bFGF預(yù)處理組的BrdU/GFAP陽性細(xì)胞數(shù)多于缺血組，但差別無統(tǒng)計學(xué)意義。(3)BrdU/NeuN免疫熒光染色結(jié)果顯示:缺血側(cè)BrdU/NeuN陽性細(xì)胞數(shù)約占BrdU陽性細(xì)胞總數(shù)的5％～8％。在SVZ區(qū)，各組大鼠均未發(fā)現(xiàn)BrdU/NeuN陽性信號;在紋狀體和皮質(zhì)區(qū)，缺血組和bFGF預(yù)處理組均有少量BrdU/NeuN陽性細(xì)胞，雖然bFGF組的BrdU/NeuN陽性細(xì)胞數(shù)多于缺血組，但差別無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:bFGF預(yù)處理能