靶向損毀觸液神經(jīng)元對(duì)內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：
　　觀察靶向損毀觸液神經(jīng)元后脊髓損傷大鼠內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的增殖情況，探討脊髓損傷后觸液神經(jīng)元對(duì)內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響，為內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞治療脊髓損傷提供新的思路。
　　方法:
　　取60只成年雌性SD大鼠隨機(jī)分成兩組：損毀組即CB-SAP組（側(cè)腦室注射觸液神經(jīng)元靶向損毀劑CB-SAP），對(duì)照組即CB組（側(cè)腦室注射觸液神經(jīng)元靶向損毀劑耦合載體CB），參照《大鼠腦立體坐標(biāo)圖譜》于大鼠腦立體定位儀上向左/右側(cè)腦室

2、緩慢注射，側(cè)腦室注射后不同時(shí)間點(diǎn)各隨機(jī)選取兩只大鼠處死，取胸10上下各0.5cm節(jié)段脊髓組織，冰凍切片，免疫熒光技術(shù)檢測(cè)CB陽(yáng)性神經(jīng)元?dú)埩羟闆r，即觸液神經(jīng)元損毀情況；靶向損毀成功后兩組均造胸10脊髓損傷，于脊髓損傷后不同時(shí)間點(diǎn)每組各隨機(jī)選取兩只大鼠處死，取胸10上下各0.5cm節(jié)段脊髓組織，冰凍切片，免疫熒光檢測(cè)脊髓Nestin表達(dá)情況，并以圖像軟件分析比較不同時(shí)間點(diǎn)的Nestin表達(dá)光密度，以BBB評(píng)分測(cè)定功能學(xué)情況。
　　結(jié)果

3、：
　　CB-SAP側(cè)腦室注射第1d時(shí)與CB標(biāo)記效果基本相同，但隨時(shí)間延續(xù)，脊髓組織CB-SAP標(biāo)記細(xì)胞數(shù)量逐漸減少，細(xì)胞輪廓模糊，至2w時(shí)大部分消失。CB-SAP組可見(jiàn)脊髓損傷術(shù)后第1d Nestin表達(dá)增加，3d至1w達(dá)高峰期，后逐漸下降，至2w左右只有少量表達(dá)，4w左右時(shí)稍有回增；CB組中術(shù)后第1d出現(xiàn)少量Nestin表達(dá)，并持續(xù)至1w左右表達(dá)無(wú)明顯增多，隨后逐漸增多，2w至4w為高峰期。兩組間比較1d、3d、2w、4w點(diǎn)差

4、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），1w點(diǎn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CB-SAP組高峰期出現(xiàn)時(shí)間較CB組提前。
　　結(jié)論：
　　側(cè)腦室注射CB和CB-SAP均可很好的逆行示蹤觸液神經(jīng)元，且標(biāo)記效果基本相同，側(cè)腦室注射CB-SAP可靶向損毀觸液神經(jīng)元，但至2周左右時(shí)仍未完全消失，這也是本實(shí)驗(yàn)的不足之處，其損毀效果有待進(jìn)一步研究；大鼠脊髓損傷后隨時(shí)間延長(zhǎng)神經(jīng)功能可得部分恢復(fù)，但觸液神經(jīng)元損毀組與未損毀組比較脊髓損傷后行為學(xué)無(wú)明顯差異，不能明