抗HBV免疫療效的特征性分析及研究.pdf

1、研究目的：
　　建立認識HBV感染抗感染及抗病毒療效分析新模式，研究核苷（酸）類似物抗HBV免疫療效的特征性改變。為突破Keeffe′sroadmap-“早期基線優(yōu)化后期底線挽救”的治療格局，變挽救療效指標“病毒學(xué)突破”為及時性治療干預(yù)指標“治療應(yīng)答不佳”；為形成聯(lián)合應(yīng)答及數(shù)字化連動療效分析新方法；為實現(xiàn)從治療起點、拐點、終點的全程優(yōu)化，以及個體化停藥治愈的理想目標奠定科學(xué)的基礎(chǔ)。
　　研究方法：
　　運用HBVDNA

2、qPCR及ECLIA等臨床檢測技術(shù)，對NAs治療CHB患者進行系統(tǒng)監(jiān)測及療效評估。同時采用流式技術(shù)分組監(jiān)測其淋巴細胞亞群分類及絕對計數(shù)。流式淋巴細胞亞群絕對計數(shù)的分析實驗流程見圖1。1、樣本及內(nèi)標熒光染色；2、FlowCytometer（FCM）系統(tǒng)檢測；3、FCSExpressV3程序化數(shù)據(jù)分析。對獲取的計量資料采用均數(shù)±標準差、中位數(shù)（上四分位數(shù)，下四分位數(shù)）表示，對外周血淋巴細胞各亞群絕對計數(shù)結(jié)果進行獨立樣本t檢驗。
　　研

3、究結(jié)果：
　　一、研究及治療組間縱向比較：
　　1、陽性對照組7的CD3+T、CD4+T、CD8+T、CD19+B、NK淋巴細胞絕對計數(shù)水平及CD4+/CD8+比值與陰性對照組8比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，P>0.05。
　　2、將基線組1、HBeAg/HBeAb形成對應(yīng)關(guān)系組2、3、4與HBsAg<1000COI組5的CD8+T和CD19+B淋巴細胞絕對計數(shù)水平比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.126，P=0.044；

4、t=2.424，P=0.024）。
　　3、將基線組1、HBeAg/HBeAb形成對應(yīng)關(guān)系組2、3、4與HBsAg陰轉(zhuǎn)（ELISA陰轉(zhuǎn)，ECLIA<10COI）組6的CD8+T和CD19+B淋巴細胞絕對計數(shù)水平比較，CD8+T細胞差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=-2.421，P=0.024)。CD19+B細胞差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=-1.015，P=0.321)。
　　二、治療各組橫向比較：
　　1、1~6組總體特異性免疫：CD3

5、+T（CD4+T、CD8+T）細胞同CD19+B細胞遠高于非特異性免疫CD3-（CD16++CD56+）NK淋巴細胞絕對計數(shù)水平(t=17.891，P<0.01)。
　　2、1~6組CD4+T+CD8+T淋巴細胞絕對計數(shù)水平亦高于CD4+T+CD19+B淋巴細胞絕對計數(shù)水平(t=4.370，P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　1、陽性和陰性對照組7、8間各淋巴細胞亞群絕對計數(shù)水平均無顯著性差異，提示可能系HBV感染與機體

6、免疫的平衡調(diào)控所致。
　　2、核苷（酸）類似物[Nucleos（t）ideanalogues，NAs]抗HBV免疫療效上有如下特征：
　　（1）基線組1、HBeAg<100COI之前各治療組2、3、4及HBsAg<10COI治療組6呈現(xiàn)出特異性免疫增殖有二次活躍時期。然而，HBsAg<1000COI治療組5的特異性免疫增殖還處于減退的狀態(tài)。提示在組4與組6間期的CD3+CD8+T細胞和CD3-CD19+B細胞增殖減退是再次免

7、疫增殖活躍的主要屏障。
　?。?）基線組1及各治療組2、3、4、5、6間CD3+CD4+T和非特異性免疫淋巴細胞CD3-（CD16++CD56+）NK細胞絕對計數(shù)水平均無差異，P>0.05。
　?。?）特異性免疫尤其是CD8+T淋巴細胞絕對計數(shù)水平的CTL二次活躍是抗HBV免疫重建的重要方面。
　　3、聯(lián)合應(yīng)答及數(shù)字化連動分析下的新型治療模式，有助于突破Keeffe優(yōu)化治療格局與“后期底線挽救”有關(guān)的免疫增殖減退屏障，

8、順利實現(xiàn)抗HBV個體化療效的理想終點。
　　創(chuàng)新點及潛在應(yīng)用價值：
　　1.在HBV感染抗感染認識上建立平衡免疫及分子調(diào)控（廣義的免疫及分子調(diào)控）概念和比勢概念。
　　2.通過流式細胞術(shù)進行CHB患者淋巴細胞亞群絕對計數(shù)水平系統(tǒng)觀測及NAs抗HBV免疫療效特征性分析。科學(xué)論證NAs抗病毒治療也有免疫重建的作用，國內(nèi)外尚無文獻報道。
　　3.為實現(xiàn)從治療起點、拐點、終點的全程優(yōu)化，以及個體化停藥治愈的理想目標奠定科