DICER基因單核苷酸多態(tài)性及其表達在肝細胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用研究.pdf

1、目的:
　　在我國，肝細胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是僅次于肺癌的最常見的原發(fā)性惡性腫瘤，也是腫瘤導(dǎo)致的相關(guān)死亡的主要原因之一。統(tǒng)計分析顯示，中國每年新增肝癌病例估計有340000例，占世界上肝癌病例的55％。此外，盡管治療手段在過去幾十年中取得了較大改善，如手術(shù)切除、化療、肝移植等聯(lián)合應(yīng)用，但肝細胞癌患者的預(yù)后仍然很差。肝細胞癌是一種由多個基因和多種環(huán)境因素引起的復(fù)雜疾病，病理學(xué)研究已經(jīng)確定了

2、一些引起肝癌發(fā)生的風(fēng)險因素，包括接觸黃曲霉毒素、酒精濫用、減少抗氧化微量營養(yǎng)素的攝入、乙型肝炎病毒感染。近些年，很多報告表明，基因多態(tài)性在肝癌的發(fā)展和預(yù)后中扮演重要角色。研究發(fā)現(xiàn)，miRNAs表達在各種疾病的發(fā)生發(fā)展過程中行使重要功能。而RAN、HIWI和Dicer三個基因在miRNAs成熟過程中發(fā)揮決定性的作用。所以本研究擬結(jié)合臨床和基礎(chǔ)研究，探索RAN、HIWI和Dicer三個基因多態(tài)性與肝癌患者易感性及預(yù)后之間的相關(guān)性。
　

3、　微小RNA(MicroRNAs，miRNAs)具有基因表達調(diào)控功能，在肝細胞癌(HCC)的發(fā)病機制及預(yù)后中扮演著重要的角色。miRNA加工基因的遺傳變異可能影響miRNAs的表達，導(dǎo)致肝癌的發(fā)生和生存風(fēng)險的變化。所以我們推測miRNA加工基因的單核苷酸多態(tài)性(SNP)可能與肝癌易感性和預(yù)后有關(guān)，以及miRNA加工基因Dicer的表達改變也對肝癌的發(fā)生發(fā)展有影響。
　　方法:
　　首先，我們采用TaqMan assay的方法

4、對312名肝癌患者和320名正常對照的miRNA加工基因的三種SNPs(RAN rs3803012 A＞G，HIWI rs10773771 T＞C，和DICER rs1057035 T＞C)進行基因分型，評估這三種SNPs和肝癌風(fēng)險關(guān)系。然后，我們通過結(jié)合實驗結(jié)果和臨床隨訪資料，研究了這三種SNPs對312名肝癌患者預(yù)后的影響。
　　其次，我們采用western blot方法分別對11例肝癌組織、11例正常肝臟組織、2種肝臟細胞(

5、HL7702和L-02)、4種肝癌細胞(LM3、HepG2、Hep3B和MHCC97H)內(nèi)Dicer蛋白的表達情況進行檢測。另外，我們使用過表達載體pcDNA3.1-DICER轉(zhuǎn)染肝癌細胞系MHCC97H后，分別使用western blot，MTT，流式細胞術(shù)及transwell方法對MHCC97H細胞內(nèi)Dicer表達情況以及MHCC97H細胞的增殖能力、凋亡情況、侵襲能力進行鑒定。
　　結(jié)果:
　　三種SNPs(RAN r

6、s3803012 A＞G，HIWI rs10773771 T＞C，和DICERrs1057035 T＞C)和肝癌風(fēng)險間沒有明顯相關(guān)性(p＜0.01)。但是，攜帶DICERrs1057035 CT+CC基因型的肝癌患者與rs1057035 TT基因型的肝癌患者相比，有明顯較長的中位生存時間（秩和檢驗P=0.018）和明顯減少的死亡率(校正HR=0.68，95％CI:0.49-0.95，P=0.022)。這些效果在年齡小于60歲，吸煙，B階

7、段，女性，經(jīng)過化學(xué)或干預(yù)療法的患者中更明顯(HR=0.48，0.60，0.69，0.46，0.67，所有p＜0.05)。
　　Dicer蛋白在肝癌組織及肝癌細胞系中的表達均低于正常肝臟組織和肝臟細胞。且轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒pcDNA3.1-DICER使肝癌細胞MHCC97H中Dicer水平明顯提高，同時降低了MHCC97H細胞的增殖能力和侵襲能力，促進了MHCC97H細胞凋亡。
　　結(jié)論:
　　本研究表明DICER rs105