脂肪酸代謝影響HBV清除的初步研究.pdf

1、目的：
　　WHV感染的Woodchuck肝炎模型被廣泛用于研究HBV感染的發(fā)病機(jī)理。脂肪酸代謝在HBV感染進(jìn)程中扮演重要角色。土撥鼠脂質(zhì)代謝相關(guān)基因APN、APNRs、PPARα的序列目前尚未見報(bào)道。本研究對(duì)土撥鼠脂質(zhì)代謝相關(guān)分子APN、APNR2及PPARα進(jìn)行了克隆和序列分析，分別從體內(nèi)和體外兩個(gè)角度研究了脂肪酸代謝對(duì)HBV清除的影響及可能機(jī)制。
　　方法：
　　1、以地松鼠APN、APNR2、PPARαmRNA

2、序列為模板設(shè)計(jì)引物克隆了土撥鼠APN基因編碼區(qū)全長(zhǎng)序列、PPARα部分序列及APNR2部分序列，DNAMAN和MEGA軟件分析了其與人及其他哺乳動(dòng)物的上述分子的同源性，RT-qPCR檢測(cè)上述三個(gè)分子不同組織中的表達(dá)量。
　　2、土撥鼠原代肝細(xì)胞接種WHV后，給予不同濃度二甲雙胍處理， ELISA方法檢測(cè)上清中的WHsAg、PCR檢測(cè)WHVDNA，RT-qPCR檢測(cè)PPARα、APNR2表達(dá)量，分析上述基因表達(dá)變化與病毒復(fù)制水平之間

3、的關(guān)系。
　　3、將120只C57BL/6雄性小鼠通過尾靜脈注射pAAVHBV1.2質(zhì)粒后隨機(jī)分為健康飲食+生理鹽水組（NS）、健康飲食+二甲雙胍組(Met)、健康飲食+羅格列酮組(Rosig)、高脂飲食+生理鹽水組(HF+NS)、高脂飲食+二甲雙胍組(HF+Met)、高脂飲食+羅格列酮組(HF+Rosig)。分別給予健康或高脂飲食，同時(shí)給予或不給予二甲雙胍或羅格列酮處理。ELISA檢測(cè)血清中HBsAg、HBeAg的含量；肝組織內(nèi)

4、HBcAg的檢測(cè)采用免疫組化法；PCR檢測(cè)血清中 HBVDNA的含量；RT-qPCR檢測(cè)肝組織中AMPKα1、AMPKα2、PPARα、PPARγ、APN、APNR2、ACC1、CPT1mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.獲得土撥鼠APN基因編碼區(qū)全長(zhǎng)735bp，獲得土撥鼠APNR2基因編碼區(qū)部分序列448bp，獲得土撥鼠PPARα基因編碼區(qū)部分序列469bp。土撥鼠APN序列與人APN序列同源性為89.39％；土撥鼠AP

5、NR2序列與人APNR2序列同源性為95.09；土撥鼠PPARα序列與人PPARα序列同源性為89.34%，與地松鼠PPARα序列同源性為99.15%。
　　2.土撥鼠APN、土撥鼠APNR2在不同組織間表達(dá)量存在明顯差異。APN在脂肪組織表達(dá)最高，APNR2在各組織中廣泛表達(dá)，PPARα在肝組織表達(dá)最高。
　　3.WPH中PPARα表達(dá)量隨二甲雙胍濃度增加而降低，上清中WHsAg、WHVDNA含量隨二甲雙胍濃度增加而下降。

6、
　　4. HBV質(zhì)粒高壓水注射后第42天，HF+Met組和HF+Rosig組血清HBsAg和HBVDNA水平、肝內(nèi)HBcAg表達(dá)明顯低于NS組和HF+NS組。
　　5.肝內(nèi)ACC1表達(dá)隨HBsAg滴度下降而降低。CPT1表達(dá)隨HBsAg滴度下降而升高。
　　結(jié)論：
　　1.獲得土撥鼠APN全長(zhǎng)序列、APNR2、PPARα部分序列。
　　2.體內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)：脂肪酸代謝調(diào)節(jié)藥物二甲雙胍和羅格列酮促進(jìn)HBV的清