紫球藻脂肪酸代謝調控.pdf

1、紫球藻(Porphyridiun)作為一種比較原始的紅藻門單細胞藻類，能夠產生許多生物活性物質，如藻膽蛋白、多不飽和脂肪酸及胞外多糖物質。為探究其高不飽和脂肪酸生物代謝調控機理，本文以紫球藻屬的Porphyridnm cruentum為研究對象，從以下幾方面進行研究，獲得如下的實驗結果： 采用碾磨預處理與氯仿.甲醇法對紫球藻脂肪酸AA及EPA的氣相色譜(GC)分析效果最優(yōu)，EPA達到1.159mg/g，AA達到2.062mg/g

2、;其他方法依次按效果排序為乙醚.石油醚法>乙醇法> KOH-甲醇法>HCl-甲醇法。紫球藻生長期第六天為收獲EPA的最佳時間，含量達到10.671mg/g;第八天為收獲AA的最佳時期，含量達到19.415mg/g。 研究不同F(xiàn)e3+濃度梯度(0，2.4×10-4mol/L，2.4×10-5mol/L，2.4×10-mol/L，2.4×10-7mol/L)對紫球藻生長及脂肪酸組成含量影響，結果表明低濃度Fe3+(2.4×10-7m

3、ol/L)能促進紫球藻生長，胞外多糖產生時間提前，并促進多糖、細胞色素、藻紅蛋白積累。Fe3+能促進細胞內脂質的積累以及紫球藻生長初期飽和脂肪酸向不飽和脂肪酸的轉化，但不利于藻細胞生長后期不飽和脂肪酸的積累。 不同濃度Fe3+使紫球藻總抗氧能力、抑制羥自由基能力在生長初期有不同程度的增加，抗超氧陰離子能力在生長初期比對照有所下降。實驗組中過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、還原型

4、谷胱甘肽(GSH)在細胞生長早期活性都明顯提高，不同濃度實驗組酶活提高程度不同，沒有明顯的濃度相關性。丙二醛(MDA)含量在生長整個周期中比對照組都有明顯增加，實驗組中ATP酶活性在生長初期有明顯的提高，說明Fe3+使細胞發(fā)生脂質過氧化作用。 利用RT-PCR結合RACE技術克隆了紫球藻Porphyridium cruentum EPA生物合成途徑相關的脂肪酸脫飽和酶Pdes基因序列，其序列長度為1044bp，編碼344個氨基酸

5、，具有6個跨膜區(qū)；多序列比對表明，Pdes氨基酸序列具有三個保守組氨酸富集區(qū)HDGNH、HHTYTN、QVEHHLFP，利用N-J距離法與其他藻類脫飽和酶構建進化樹，與海洋細菌及藍藻門聚為一類。利用HHpred結合模擬程序，獲得脫飽和酶三級結構預測圖。 對藻類△6脫飽和酶基因密碼子及堿基位置偏好進行了分析。結果表明：在已知藻類△6基因的密碼子偏好不明顯，說明藻物種間的差異對△6脫飽和酶基因密碼子偏好性的影響較小，該基因在進化上保