苯致SD大鼠造血組織DNA損傷與XPD基因表達(dá)及甲基化的關(guān)系.pdf

1、目的：探討XPD基因甲基化及表達(dá)在苯致SD大鼠造血組織損傷中的作用及其可能的機制。
　　方法:30只雄性SD大鼠被隨機分為5組，每組6只，分別為空白對照組（未經(jīng)任何處理）、溶劑對照組（玉米油）、苯低劑量組（200mg/kg）、苯中劑量組（400mg/kg）、苯高劑量組（800mg/kg），除空白對照組外，各處理組每天灌胃1次，連續(xù)28天。灌胃染毒結(jié)束后1. HE染色觀察股骨的病理組織學(xué)結(jié)構(gòu)改變;2.采用單細(xì)胞凝膠電泳（SCGE）檢

2、測外周血細(xì)胞及骨髓細(xì)胞DNA損傷情況;3.采用實時熒光定量PCR法檢測骨髓細(xì)胞中XPD基因的mRNA轉(zhuǎn)錄水平;4.免疫印跡法（WB）檢測骨髓細(xì)胞XPD蛋白的表達(dá)水平;5.采用重亞硫酸鹽測序法（BSP）檢測血液及骨髓細(xì)胞中XPD基因甲基化狀態(tài)。
　　結(jié)果：1.病理組織學(xué)結(jié)果顯示，隨著染毒劑量的增加，苯染毒組骨小梁出現(xiàn)明顯斷裂現(xiàn)象，軟骨細(xì)胞層排列更加紊亂，破裂細(xì)胞增多，骨髓造血細(xì)胞減少，脂肪滴增多;2. SCGE結(jié)果提示，苯染毒可致外

3、周血及骨髓細(xì)胞DNA損傷，且損傷效應(yīng)隨著染毒濃度增加而增大;3. Taqman探針實時定量PCR法結(jié)果顯示，空白對照組、溶劑對照組、苯低、中、高劑量組骨髓細(xì)胞XPD mRNA相對表達(dá)量分別為0.600±0.0484、0.454±0.331、0.501±0.446、1.068±0.666、1.072±0.047，與空白對照組比較，苯各染毒組均表達(dá)升高，且苯染毒中、高劑量組與空白對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;4. WB檢測結(jié)果

4、顯示，空白對照組、溶劑對照組、苯染毒低、中、高劑量組XPD蛋白的表達(dá)量分別為（102.78±2.32）％、（100.00±0.00）%、（135.68±13.67）%、（154.48±9.78）%、（176.55±11.05）%，苯染毒各劑量組與對照組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），且苯染毒各劑量組之間比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;5. BSP結(jié)果顯示，空白對照組、溶劑對照組、苯低、中、高劑量組的骨髓細(xì)胞甲基化率分