DNA甲基化調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)基因小鼠外源基因表達(dá)的研究.pdf

1、StudyofDNAmethylationregulatingtransgeneexpressionintransgenicmiceThesissubmittedtoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomy1一一ZhouYang(CollegeofAnimalScienceandTechnology)S

2、upervisor：ProfPanQingjieQingdaoChina青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要DNA甲基化調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)基因小鼠外源基因表達(dá)的研究摘要近年來，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物已被應(yīng)用于研宄基因功能，提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能，建立器官模型等方面。然而，成功獲得轉(zhuǎn)基因動(dòng)物并不是轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究的最終目的，通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)為人類的需求服務(wù)才是亟需解決的問題。在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中外源基因的遺傳和表達(dá)穩(wěn)定性已經(jīng)引起研究者們的廣泛關(guān)注，并且仍然是轉(zhuǎn)基因動(dòng)物遺傳育種邁向產(chǎn)業(yè)

3、化的絆腳石。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)同一寓的純合轉(zhuǎn)基因小鼠的綠色熒光表型不同，Yj了探討其潛在的分子機(jī)制，我們vXGAG啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)綠色熒光蛋白基因(Egfp)袁達(dá)的轉(zhuǎn)基因小鼠為研究對(duì)象，以外源基因露印為研究目標(biāo)，通過實(shí)時(shí)熒光定量PeR，蛋白質(zhì)印跡和重亞硫酸鹽測(cè)序法檢測(cè)在不同綠色熒光表型的轉(zhuǎn)基因小鼠中各組織的外源基因?qū)徏颖磉_(dá)水平，DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)水平：GAG啟動(dòng)子區(qū)的DNA甲基化水平，Egfp基因編碼區(qū)的DNA甲基化水平以及對(duì)其表達(dá)水平

4、和DNA甲基化水平之間建立相關(guān)性分析。主要研究結(jié)果如下：1在純合轉(zhuǎn)基因小鼠的各個(gè)組織中，外源基因?qū)張?chǎng)的表達(dá)水平各不相同，且差異顯著(P005)。4通過分別建立OAG啟動(dòng)子區(qū)DNA甲基化和DNA甲基轉(zhuǎn)移酶Dnm七1，Dnmt3a，Dnmt3b表達(dá)之間的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，僅Dnmt3b的表達(dá)與CAG啟動(dòng)子區(qū)DNA甲基化呈正相關(guān)關(guān)系(r：。=080，P001)。在本研究中，通過Dnmt3b相關(guān)的CAB啟動(dòng)子區(qū)DNA旱基化抑制了外源基因的表達(dá)，并