利拉魯肽對高脂喂養(yǎng)大鼠心肌組織自噬的影響及機制研究.pdf

1、自噬（Autophagy）意為自體吞噬，即細胞將自身的物質消化清除，它是一種依賴于溶酶體的保守的代謝途徑，是一種基本的細胞代謝過程，主要降解并回收細胞內一些長壽命的蛋白質以及受損的細胞器，其作用主要是為了維持細胞的自身穩(wěn)定[1]。自噬在維持細胞的生命活動中發(fā)揮著重要作用，它維持細胞的正常功能，以實現(xiàn)細胞代謝、細胞器更新的需要，是細胞內的一種自我保護機制，是機體應對體內外應激反應的機制之一。正常生理狀態(tài)下的自噬若被抑制會導致體內有害物質的

2、堆積，而過度的自噬又會破壞細胞的正常結構。因此自噬過度或者是不足均會造成細胞損傷。自噬作為一種普遍的生命現(xiàn)象，廣泛參與了多種生理病理過程。因為自噬活性的改變在多種病理條件下都有重要意義，因此調控自噬可能成為某些人類疾病的潛在治療靶點。
　　心肌細胞（CMs）是一種長壽命分裂后期細胞，分化再生能力有限，心肌細胞自噬對于維持心臟功能和活性具有重要的作用。在許多心臟疾病中都發(fā)現(xiàn)了蛋白質的聚集以及受損細胞器的堆積，比如高血壓，心肌梗塞（M

3、I）以及擴張型心肌?。―CM）[2,3]，說明在這些疾病中，自噬水平是不足的。研究表明自噬可影響心肌重構以及其它的心臟疾病，因此調控自噬可能成為心血管疾病防治的潛在靶點之一。有研究表明，高脂喂養(yǎng)的小鼠，其心肌纖維化的程度增加，并且自噬基因LC-3Ⅱ的水平下降，說明高脂飲食可能會導致心肌肥厚并使自噬水平降低。此外，高脂喂養(yǎng)24周的小鼠其心肌組織受到損害，同時心肌的自噬水平受到抑制。胰高血糖素樣肽-1（GLP-1）是小腸L細胞分泌的一種生理

4、性肽類激素，它可增加胰島素的生物合成和分泌，刺激胰島細胞的增殖和分化，具有多種生理學作用，正逐漸成為糖尿病治療的熱點。目前對于其研究已不僅局限于它對于胰腺的作用，多項研究表明GLP-1對胰腺及腎臟等重要器官都發(fā)揮著保護性的作用，同時在這些器官中觀察到GLP-1與自噬水平的改變有關[4,5]，但其是否影響了心肌的自噬尚不清楚。為此，本研究將觀察利拉魯肽對高脂喂養(yǎng)大鼠心肌組織自噬水平的影響，并探討其作用機制。
　　目的：觀察利拉魯肽對

5、高脂喂養(yǎng)大鼠心肌組織自噬水平的影響，測定自噬相關分子Beclin1、LC-3Ⅱ、ATG7、p62的表達，以探討利拉魯肽對高脂狀態(tài)下心肌自噬的影響及其機制發(fā)揮作用的可能機制。
　　方法:40只雄性健康SpragueDawldy（SD）大鼠（200-250g），適應性喂養(yǎng)1周后隨機分為5組：正常對照組（給予普通飼料喂養(yǎng)），高脂對照組，高脂+利拉魯肽低（0.4mg/Kg/d）、中（0.6mg/Kg/d）、高（0.8mg/Kg/d）劑量干

6、預組（均給予高脂飼料喂養(yǎng)），每組8只大鼠。各個實驗組分別皮下注射相應劑量的利拉魯肽，正常對照組及高脂對照組給予等體積生理鹽水。每周稱量大鼠體重。實驗12周后腹主動脈放血處死大鼠，收集血清測定血糖、血清甘油三酯（TG），總膽固醇（TC），低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C），高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C），血清BNP水平；Real-TimePCR檢測心肌組織Beclin1、LC-3Ⅱ、ATG7、和p62的mRNA表達；Western-Blo

7、t檢測心肌組織Beclin1、LC-3Ⅱ、AMPK、P-AMPK、mTOR和P-mTOR的蛋白表達。
　　結果：
　　1、利拉魯肽對體重的影響：實驗12周末，高脂對照組體重明顯高于正常對照組（P＜0.05），利拉魯肽低、中、高劑量組體重明顯低于高脂對照組（P＜0.05），但是利拉魯肽各劑量組體重差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　2、利拉魯肽對血糖及血脂的影響：實驗12周末，高脂對照組血糖明顯高于正常對照組（P＜0

8、.05），利拉魯肽低、中、高劑量組明顯低于高脂對照組（P＜0.05）；高脂對照組血清TG水平明顯高于正常對照組（P＜0.05），利拉魯肽低、中、高劑量組血清TG水平明顯低于高脂對照組（P＜0.05）；高脂對照組血清TC較正常對照組升高但無統(tǒng)計學差異（P>0.05），利拉魯肽低、中、高劑量組TC較高脂組降低，但只有高劑量組與其有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）；高脂對照組血清LDL-C水平較正常對照組升高，HDL-C水平較正常對照組降低，均無統(tǒng)

9、計學差異（P>0.05），利拉魯肽各劑量組LDL-C較高脂對照組降低，HDL-C水平較高脂對照組升高，也均無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。
　　3、利拉魯肽對血清BNP的影響：實驗12周末，與正常對照組相比較，高脂對照組的BNP水平明顯增加（P＜0.05），利拉魯肽組明顯低于高脂對照組(P＜0.05），但是利拉魯肽各劑量組間BNP水平差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　4、利拉魯肽對心肌組織自噬相關分子的蛋白及基因表達的影

10、響：實驗12周末，高脂對照組Beclin1、LC-3Ⅱ蛋白表達明顯下調（P＜0.05），利拉魯肽各劑量組顯著上調Beclin1、LC-3Ⅱ蛋白的表達（P＜0.05），Beclin1、LC-3Ⅱ基因表達同蛋白表達一致，高脂對照組ATG7的mRNA表達明顯下調（P＜0.05），P62的mRNA表達明顯上調（P＜0.05），利拉魯肽各劑量組則與之相反。
　　5、心肌組織AMPK-mTOR通路信號分子的表達：AMPK及mTOR的蛋白在各組

11、間沒有差異（均P＞0.05）。與正常對照組相比，高脂對照組P-AMPK的蛋白表達顯著下調（P＜0.05），P-mTOR的蛋白表達顯著上調（P＜0.05），與高脂對照組相比，利拉魯肽干預后P-AMPK蛋白表達顯著上調（P＜0.05），P-mTOR蛋白表達顯著下調（P＜0.05）。
　　結論：
　　1、高脂飲食可以使大鼠的心功能受損，表現(xiàn)為大鼠血清BNP水平的升高，利拉魯肽干預后可以改善這種受損情況。
　　2、高脂飲食下調