基底硬度對肝細胞胞間粘附復合物穩(wěn)定性影響的實驗研究.pdf

1、目的：通過比較分析不同硬度基底上的融合生長肝細胞（L02）的差異，探查細胞間粘附復合物穩(wěn)定性不同的成因，加深微觀力學環(huán)境改變對細胞群體生長行為及其表型影響的進一步認識。
　　方法：構(gòu)建細胞體外培養(yǎng)模型，制備聚乙烯醇水凝膠基底膜，硬度分別為3.6kPa、10kPa、30kPa。分別對應正常的肝組織、纖維化中期的肝組織和纖維化末期的肝組織的硬度。運用實時顯微拍攝觀察在不同硬度基底上L02細胞的形態(tài)特征；應用免疫熒光染色技術檢測不同硬度

2、基底上的細胞肌動蛋白骨架構(gòu)象、β-連環(huán)蛋白和vinculin表達分布；采用Western Blotting方法檢測不同硬度基底的細胞膜上β-連環(huán)蛋白的表達及細胞質(zhì)中vinculin的表達和β-連環(huán)蛋白的磷酸化水平。
　　結(jié)果：基底硬度對L02細胞的生物學行為具有重要影響。（1）融合生長的L02細胞呈圓形或多邊形，隨基底硬度增加，L02細胞的球形指數(shù)增大。（2）采用EDTA處理匯合生長的L02細胞，細胞逐漸分離，形態(tài)學表現(xiàn)現(xiàn)為細胞逐

3、漸變圓，鋪展面積和細胞周長逐漸縮小。隨著硬度增大，L02細胞從融合狀態(tài)到細胞-細胞間連接被破壞所需的時間依次變短。（3）融合生長的L02細胞在軟基質(zhì)上肌動蛋白微絲裝配成皮質(zhì)下環(huán)，β-連環(huán)蛋白集中分布于細胞間連接處。隨著基底硬度增大，肌動蛋白骨架環(huán)削弱，并在胞質(zhì)內(nèi)形成絲狀纖維，β-連環(huán)蛋白彌散分布于細胞質(zhì)中。（4）隨基底硬度增大，融合生長的L02細胞膜上β-連環(huán)蛋白表達顯著降低（P<0.01），細胞質(zhì)中vinculin和p-β-連環(huán)蛋白(

4、Tyr654)的表達量顯著增加（P<0.01）。
　　結(jié)論：（1）基底硬度影響肝細胞胞間粘附復合物穩(wěn)定性，基底硬度越大，復合物穩(wěn)定性越差。（2）細胞連接關鍵蛋白β-連環(huán)蛋白與黏著斑輔助蛋白vinculin的分布和表達受基底硬度影響，兩者隨基底硬度變化趨勢顯示，基底硬度與細胞間粘附復合物裝配成負相關，與黏著斑裝配成正相關。細胞間粘附作用與細胞-基底粘附作用存在競爭關系。（3）肌動蛋白骨架微絲構(gòu)型受基底硬度調(diào)控，其作為細胞力學作用的主