基底硬度變化對肝細胞骨架構(gòu)象及細胞連結(jié)方式的影響.pdf

1、肝纖維病變的主要特征是胞外基質(zhì)蛋白大量堆積，組織進行性硬化，其中環(huán)境物理硬度的變化對肝內(nèi)細胞的生物學行為有著巨大的影響?；子捕韧ㄟ^影響細胞粘附調(diào)整細胞預應力，進而影響細胞形態(tài)、骨架裝配、黏著斑形成、細胞間連接方式等多種行為，這些行為對細胞表型的維持是至關重要的。本研究通過建立硬度可控的體外培養(yǎng)模型，探索基底硬度和細胞外基質(zhì)密度對肝實質(zhì)細胞生物學行為的影響，討論了基質(zhì)硬度變化在纖維化病變進程中的作用。
　　 目的：通過制備硬度可

2、控聚丙烯酰胺培養(yǎng)基底模擬不同硬度的體外培養(yǎng)環(huán)境，研究肝細胞對不同硬度和胞外基質(zhì)密度的響應，從而揭示肝纖維化病變過程中基質(zhì)變硬對肝實質(zhì)細胞的影響。
　　 方法：采用形態(tài)學觀察，免疫熒光染色等手段，研究個體細胞和融合細胞在不同硬度、胞外基質(zhì)密度的聚丙烯酰胺培養(yǎng)基底上細胞形態(tài)學、骨架裝配方式、E-鈣粘素表達、黏著斑蛋白-樁蛋白表達的差別；并通過圖像分析軟件對上述結(jié)果進行定量分析，揭示細胞生物學行為變化與基底硬度的相關性。
　　

3、 結(jié)果：生長在不同硬度基底上細胞長短徑比、球形指數(shù)差異顯著(p＜0.05)，細胞極化程度隨基底硬度的增加而增加，較軟質(zhì)基底(3.6kPa)上細胞肌動蛋白微絲裝配成沿細胞周邊分布的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，細胞間形成邊-邊接觸的切向連接。而在硬度較高基底上，細胞肌動蛋白微絲裝配成沿細胞長軸排布的應力纖維，細胞間形成輻射狀細胞連接；免疫熒光染色顯示，細胞中E-鈣粘素的平均熒光強度隨基底的變硬而減少，而樁蛋白平均熒光強度的則相反；融合細胞在軟質(zhì)基底上細胞有形