FABP5-PPARβ-δ信號轉導通路對Ras雄性小鼠肝癌發(fā)生發(fā)展的影響.pdf

1、目的:
　　探究FABP5/PPARβ/δ信號轉導通路對Ras雄性小鼠肝癌發(fā)生發(fā)展的影響，為肝癌的防治研究提供有效的基礎數(shù)據(jù)。
　　方法:
　　1.體內(nèi)實驗
　　對病理證實的正常雄性小鼠肝組織及Ras雄性小鼠肝癌組織及Ras雄性小鼠肝癌旁組織進行總RNA及蛋白質的提取。應用RT-qPCR方法檢測FABP5、PPARβ/δ、PDK1及ILK的mRNA表達水平。用Western blot方法檢測細胞外信號調節(jié)激酶1/

2、2(ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT、NF-κB、磷酸化NF-κB、NF-κB抑制蛋白亞基(I-κB)、脂肪酸結合蛋白5(FABP5)、過氧化物酶體增殖物激活受體β/δ(PPARβ/δ)的蛋白水平。
　　2.體外實驗
　　提取人正常肝細胞LO2和肝癌細胞Hep3B的總蛋白質，Western blot方法檢測p-PI3K、

3、PI3K、p-AKT、AKT、I-κB的蛋白水平。用PI3K、AKT抑制齊劑處理Hep3B細胞，檢測FABP5的蛋白表達水平。
　　結果:
　　1.體內(nèi)實驗
　　(1)病理檢測結果表明:Ras癌基因誘導了Ras雄性小鼠的多發(fā)性肝腫瘤，體積較大，直徑≥5mm;病理切片的診斷結果表明，肝腫瘤組織與其周圍正常肝組織的界限清楚，肝腫瘤組織周圍正常肝組織的2～3層肝細胞由于受到擠壓而呈現(xiàn)出梭形或紡錘形;肝腫瘤組織中的肝細胞分化良

4、好，可見正常的肝小葉結構，肝腫瘤細胞的胞質呈現(xiàn)出嗜堿性改變，腫瘤細胞出現(xiàn)腫脹變性，以及中等程度的脂肪變性，部分肝腫瘤細胞內(nèi)還可見嗜酸性包涵體。Ras轉基因雄性小鼠的肝臟沒有發(fā)生炎癥、肝纖維化、肝硬化的病理學特征。
　　(2) PPARβ/δ表達情況的檢測:其中，從蛋白結果可知，正常雄性小鼠肝組織、Ras雄性小鼠肝癌旁組織中PPARβ/δ的蛋白表達水平顯著高于Ras雄性小鼠肝癌組織;正常雄性小鼠肝組織中PPARβ/δ的蛋白表達水平高

5、于癌旁組織。RT-qPCR結果顯示，PPARβ/δ在正常雄性小鼠肝組織、Ras雄性小鼠的癌旁組織及肝癌組織中呈逐步升高趨勢，但無顯著差異。
　　(3)信號通路檢測結果表明:與正常雄性小鼠肝組織、Ras雄性小鼠癌旁組織相比，肝癌組織中ERK和p-ERK的蛋白水平都顯著升高。與正常雄性小鼠肝組織相比，Ras雄性小鼠癌旁組織中ERK的蛋白水平?jīng)]有顯著變化，而p-ERK的蛋白水平卻顯著升高。與正常雄性小鼠肝組織、Ras雄性小鼠癌旁組織相比

6、，肝癌組織中PI3K、p-PI3K、p-AKT、p-NF-κB、核蛋白NF-κB、FABP5的水平顯著升高，NF-κB、質蛋白NF-κB、I-κB、PPARβ/δ的蛋白水平顯著降低。癌旁組織與正常雄性小鼠組織相比，p-PI3K、NF-κB、質蛋白NF-κB、和I-κB的蛋白水平?jīng)]有顯著變化。
　　2.體外實驗
　　(1) PPARβ/δ表達水平的檢測結果表明:人肝癌Hep3B細胞PPARβ/δ的蛋白表達水平顯著高于人正常LO

7、2肝細胞。
　　(2)信號通路檢測結果表明:對于p-PI3K蛋白，人正常肝細胞系L-O2和人肝癌細胞系Hep3B沒有顯著差異。對于PI3K總蛋白，人正常肝細胞系L-O2卻顯著高于人肝癌細胞系Hep3B。而I-κB蛋白在兩個細胞中的表達沒有顯著差異。
　　(3)抑制劑處理實驗結果表明:與Hep3B細胞相比，PI3K抑制劑LY294002處理Hep3B細胞使FABP5的蛋白表達水平顯著下降，其蛋白表達水平也隨之在24-48 h明