版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、目的:證明Abl—Abi-1—WAVE2信號轉導通路的存在并研究其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用及作用機制方法:為證明Abl—Abi-1—WAVE2信號轉導通路的存在并研究其在癌細胞極化運動中的作用及作用機制,我們在以fibronectin(FN)刺激黑色素瘤B16細胞產(chǎn)生運動的模型中檢測Abi-1/WAVE2復合物,采用定位突變法證明Abi-1與WAVE2直接結合并闡明其結合位點;以用于侵襲性研究的經(jīng)典細胞系—黑色素瘤細胞系B16為研究對象,
2、以fibronectin(FN)刺激B16細胞使之發(fā)生極化運動(生成細胞扇形偽足)為研究模型,研究Abl/Abi-1/WAVE2在細胞極化運動中的作用及對肌動蛋白聚合的影響,并用定點突變法闡明其作用機制;還采用RNA干擾技術使B16細胞中的Abi-1蛋白表達缺失,進而觀察其對細胞伸展和移動的影響。
為研究Abl—Abi-1—WAVE2信號轉導通路在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用,我們采用共聚焦顯微鏡觀察Abl/Abi-1/WAVE2
3、在細胞有絲分裂末期的胞質(zhì)分裂過程中的定位,并采用RNA干擾技術使鼠NIH3T3細胞及人乳腺癌MCF-7細胞中的Abi-1蛋白表達缺失,觀察Abi-1蛋白穩(wěn)定缺失對細胞增殖的影響,并初步探討Abi-1蛋白缺失后所引起的P53、CDC25、CDK1及CyclinB1表達的改變;采用軟瓊脂克隆形成實驗觀察MCF-7細胞Abi-1穩(wěn)定缺失后細胞克隆形成情況,并用裸鼠成瘤實驗檢測Abi-1穩(wěn)定缺失對細胞成瘤情況的影響。
結果:在證明
4、Abl—Abi-1—WAVE2信號轉導通路的存在并研究其在癌細胞極化運動中的作用及作用機制部分,(1)在以fibronectin(FN)刺激黑色素瘤B16細胞產(chǎn)生運動的模型中檢測到Abi-1/WAVE2復合物,采用定位突變法證明 Abi-1的coiled-coil結構域中的特定部位直接與 WAVE2 N端的WHD結構域相結合;(2)以用于侵襲性研究的經(jīng)典細胞系—黑色素瘤細胞系B16為研究對象,利用fibronectin(FN)刺激黑色素
5、瘤細胞B16產(chǎn)生極化運動的實驗中發(fā)現(xiàn),Abi-1使WAVE2由胞漿移位到細胞偽足扇形邊緣,并介導肌動蛋白在該部位聚合形成膜皺褶和扁平偽足;當WAVE2的WHD結構域被去掉,則Abi-1/WAVE2的結合遭到破壞,此時Abi-1在胞漿中呈點狀分布,而WAVE 2幾乎全部進入細胞核,在此狀態(tài)下的細胞即使接受FN刺激也不發(fā)生極化運動研究;(3)Abl存在于Abi-1/WAVE2復合物中,在細胞極化運動中,Abl/Abi-1/WAVE2與Rac
6、1和actin一起共定位于細胞頭部膜邊緣,用定點突變法掉WAVE2的酪氨酸磷酸化位點,表明Abi-1介導Abl對WAVE2的Y150位點磷酸化,體外肌動蛋白聚合試驗表明這種磷酸化在WAVE2活性調(diào)控中起促進作用;(4)采用RNA干擾技術使B16細胞中的Abi-1蛋白表達缺失時,WAVE2在偽足頭部聚集減少,B16F1細胞伸展面積減少,且細胞膜呈毛刺狀。
在研究Abl—Abi-1—WAVE2信號轉導通路在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用
7、部分,(1)共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),Abl、Abi-1、WAVE2、CDK1以及actin共定位于細胞胞質(zhì)分裂過程中的收縮環(huán)形成部位,(2)采用RNA干擾技術瞬時轉染,流式細胞術檢測到細胞發(fā)生G1期阻滯,且不發(fā)生明顯的細胞凋亡;(3)RNA干擾使鼠NIH3T3細胞及人乳腺癌MCF-7細胞中的Abi-1蛋白穩(wěn)定缺失時,可見NIH3T3和MCF-7細胞中出現(xiàn)明顯的多倍體和異倍體細胞;(4)Abi-1蛋白缺失后所引起P53表達明顯增多、CDC2
8、5表達減少、CDK1-15p表達減少,CyclinB1主要分布于多倍體細胞的胞漿中,且多倍體和異倍體細胞的Ki-67高表達;(5)軟瓊脂克隆形成實驗表明,具有多核細胞的Abi-1缺失細胞株與對照組MCF-7細胞在軟瓊脂上形成的克隆數(shù)無明顯差異,但95%的Abi-1穩(wěn)定缺失株的克隆為多核克隆,而對照組MCF-7細胞株多核克隆不足1%;裸鼠成瘤實驗表明Abi-1穩(wěn)定缺失后細胞可以成瘤,且瘤體積和重量高于對照組MCF-7細胞株。
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- ERK信號轉導通路在Barrett食管發(fā)生發(fā)展中的作用.pdf
- STAT3信號通路在膀胱腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用.pdf
- SNAIL泛素化調(diào)節(jié)在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用研究.pdf
- 癌基因AURKA在腫瘤發(fā)生發(fā)展中作用機制的研究.pdf
- TGF-β-Smads信號轉導通路關鍵基因在賁門腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用機理研究.pdf
- PIP5KL1在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的功能研究.pdf
- 轉化生長因子β1-Smad信號轉導通路在肝細胞性肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用機制研究.pdf
- Wnt信號轉導通路在皮膚腫瘤中的作用研究.pdf
- Wnt2-β-catenin信號通路在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展中作用的研究.pdf
- Notch信號通路在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機制研究.pdf
- Notch信號通路在脈絡膜新生血管發(fā)生發(fā)展中的作用.pdf
- Caveolin-1在前列腺癌中的表達及其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用.pdf
- 信號通路與腫瘤發(fā)生
- MiR-17家族成員在腫瘤發(fā)生發(fā)展中作用機制的研究.pdf
- 2010cb529400-腫瘤干細胞在惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用及機理研究
- mTOR-4E-BP1信號通路在賁門腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用.pdf
- Hedgehog信號通路在肝細胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其機制.pdf
- 中藥多糖在信號轉導通路中抗腫瘤作用及其機理研究.pdf
- β1亞基在腫瘤發(fā)生中作用的研究.pdf
- 脂代謝相關基因CGI-58在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用及調(diào)控機制研究.pdf
評論
0/150
提交評論