EGFR-STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在大鼠實(shí)驗(yàn)性肝癌發(fā)生中的作用.pdf

1、背景和目的： 許多實(shí)體腫瘤中存在表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)或其配體轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(TGFQ)的高表達(dá)或異常表達(dá)。該通路的高活化在腫瘤細(xì)胞的增殖、細(xì)胞凋亡的抑制、血管生成、腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮重要作用。其可能機(jī)制為二者的高表達(dá)形成自分泌環(huán)，從而使下游信號(hào)傳導(dǎo)通路持續(xù)激活。 EGFR的下游分子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子3(STAT3)通常存在于細(xì)胞漿中，可發(fā)揮細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及基因轉(zhuǎn)錄激活雙重作用，當(dāng)其705位酪氨酸被磷酸化后

2、，二聚化而轉(zhuǎn)入核內(nèi)調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞重要的生物學(xué)過程。在許多腫瘤如乳腺癌、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌等中都發(fā)現(xiàn)STAT3持續(xù)活化，在促進(jìn)增生及抑制凋亡中發(fā)揮十分重要的作用。但迄今為止還沒有發(fā)現(xiàn)持續(xù)活化的STAT3突變體。所以推測(cè)，上游信號(hào)傳導(dǎo)通路的異常激活，可能是STAT3持續(xù)活化的原因。對(duì)頭頸部鱗狀細(xì)胞癌及乳腺癌的研究表明，STAT3的持續(xù)活化與EGFR／TGFQ自分泌環(huán)的形成有關(guān)。 肝癌中對(duì)STAT3分子的表達(dá)及活化機(jī)制的研究

3、相對(duì)較少，本實(shí)驗(yàn)中，通過致癌物3’一甲基一4一二甲基偶氮苯(3’Me-DAB)建立了肝癌動(dòng)物模型，目的是探討和明確以下幾個(gè)問題：1)大鼠肝癌形成過程中EGFR、TGFα、STAT3的表達(dá)水平是否有變化及如何變化：2)肝癌中，STAT3在轉(zhuǎn)錄、表達(dá)及活化水平如何變化，是否存在STAT3的持續(xù)活化及其與上游EGFR通路的關(guān)系；3)該通路與肝癌細(xì)胞增殖間的關(guān)系；4)在肝癌中，STAT3下游分子Bcl一2、P21的表達(dá)。材料和方法： 1

4、．肝癌模型的制作：含有O．06％的3’Me—DAB純玉米粉喂養(yǎng)wistar大鼠12周，之后普通混合飼料喂養(yǎng)，誘發(fā)大鼠肝癌。 2．免疫組織化學(xué)法檢測(cè)EGFR、TGFα、STAT3在誘癌各階段的表達(dá)，P—STAT3、PCNA在肝癌及正常肝組織中的表達(dá)。 3．制備針對(duì)STAT3mRNA的DNA探針，原位雜交法檢測(cè)STAT3mRNA在肝癌及正常肝組織中的表達(dá)。 4．KS400圖像分析系統(tǒng)對(duì)免疫組織化學(xué)及原位雜交結(jié)果進(jìn)行圖

5、像半定量分析。 5．蛋白印跡方法檢測(cè)STAT3、P—STAT3、Bcl一2、P21在肝癌及正常肝組織中的表達(dá)。 結(jié)果： 1．大鼠實(shí)驗(yàn)性肝癌模型經(jīng)歷肝細(xì)胞變性壞死，肝細(xì)胞、卵圓細(xì)胞增生，成纖維細(xì)胞增生，肝硬化，肝癌形成的形態(tài)學(xué)變化。 2．EGFR、TGFQ、STAT3在誘癌早期肝細(xì)胞壞死和修復(fù)期表達(dá)有升高趨勢(shì)(p

6、STAT3、P—STAT3在肝癌中100％表達(dá)，與正常組織及癌周肝組織比較，肝癌中EGFR、TGFQ、P—STAT3表達(dá)顯著增強(qiáng)(p

7、果顯示肝癌中細(xì)胞增生水平明顯升高，且P-STAT3表達(dá)與PCNA的表達(dá)正相關(guān)(p

8、 2．EGFR、TGFQ、STAT3在肝癌誘癌各個(gè)時(shí)期有不同程度高表達(dá)，提示EGFR—STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與大鼠肝癌的形成。 3．肝癌中EGFR、TGFQ表達(dá)升高，STAT3轉(zhuǎn)錄、蛋白表達(dá)及活化水平均上調(diào)，提示大鼠實(shí)驗(yàn)性肝癌中存在EGFR—STAT3通路的激活。 4．P—STAT3與腫瘤中TGFQ的表達(dá)呈正相關(guān)，與PCNA、Bcl-2的表達(dá)呈正相關(guān)，提示STAT3在肝癌中的持續(xù)活化是上游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路EGFR—TGF