馬甲子抗腫瘤活性成分的分離鑒定及提取純化工藝研究.pdf

1、馬甲子 Paliurus ramosissimus(Lour.) Poir.系鼠李科銅錢屬植物，又名鐵籬笆、銅錢樹。馬甲子藥材(葉)味苦，性平，能祛風(fēng)散瘀，解毒消腫。主治風(fēng)濕痹痛，跌打損傷，咽喉腫痛，癰疽。此外，經(jīng)本課題組的前期研究證實(shí)其乙醇提取物具有抗腫瘤方面的作用且療效較好。
　　化學(xué)成分預(yù)試驗(yàn)結(jié)果表明馬甲子葉提取物中含有三萜類、生物堿類、香豆素類、黃酮類等成分。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道所含的三萜類成分主要包括24-羥基美洲茶酸二甲酯，2

2、7-羥基美洲茶酸二甲酯，美洲茶酸，美洲茶酸-28β-葡萄糖酯和異美洲茶酸-28β-葡萄糖酯等。還含有一種環(huán)肽生物堿馬甲子堿(paliurine)B。但該藥的相關(guān)藥效成分未見報(bào)道。
　　為了探索馬甲子葉中的抗腫瘤活性成分，我們對(duì)馬甲子葉中的某些成分進(jìn)行了提取分離、結(jié)構(gòu)鑒定和抗腫瘤等方面的研究，得到了新的活性單體成分A和成分B，經(jīng) MS、1H-NMR、13C-NMR等鑒定成分A為2α，27-2(p-hydroxy trans cinn

3、amoyloxy)-betulinicacid。該單體系首次從該屬植物中分離得到的新化合物。為了進(jìn)一步研究該成分，制定了本文的含量測(cè)定方法。
　　以該單體化合物為指標(biāo)成分，采用BDS HYPERSIL C18色譜柱（4.6mm×100mm×2.4μm），以乙腈-0.1％甲酸溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為320 nm。研究結(jié)果表明，該方法快速，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于測(cè)定馬甲子藥材中成分A的含量。馬甲子

4、藥材中成分A含量的測(cè)定能夠初步評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地及采收期馬甲子藥材的質(zhì)量，為后續(xù)研究及民間癌癥患者用藥提供了一定的參考。為了便于后期的研究，我們對(duì)該藥材進(jìn)行了提取純化方面的研究。
　　以成分A的含量為指標(biāo)，針對(duì)馬甲子藥材中成分A的提取工藝進(jìn)行了研究。通過前期的單因素試驗(yàn)初步確定了提取工藝并采用L9（34）正交試驗(yàn)對(duì)提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化，得到最佳工藝為10倍量95％的乙醇回流提取1 h。結(jié)果表明，最終所確定的提取工藝穩(wěn)定、可靠。
　　

5、通過比較9種大孔吸附樹脂對(duì)馬甲子提取物中成分A的靜態(tài)及動(dòng)態(tài)吸附試驗(yàn)，選取了最佳樹脂型號(hào)并對(duì)其純化工藝條件進(jìn)行了優(yōu)化，得到最佳工藝參數(shù)為：采用X-5型大孔吸附樹脂，馬甲子藥材提取物的上樣量為0.1 g/g濕樹脂，濃度為100g/L的上樣溶液以1 BV/h的流速進(jìn)行吸附，后使用95％乙醇以1.5 BV/h的流速洗脫，洗脫劑用量為8BV。此工藝條件下，成分A得到了較好的富集純化，馬甲子提取物中成分A的含量由原來的1.68%提高到8.92%，轉(zhuǎn)