青藤堿對THP-1源性泡沫細胞活性影響及NF-κB信號通路機制研究.pdf

1、實驗背景：既往的研究發(fā)現(xiàn)青藤堿通過抑制NF-κB炎癥信號通路的活性有很好的治療類風濕性關節(jié)炎的效果，而 NF-κB信號通路在動脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）發(fā)生發(fā)展過程中至關重要，泡沫細胞的出現(xiàn)是動脈粥樣硬化形成的早期標志性炎癥細胞。通過動物實驗和體外實驗發(fā)現(xiàn)青藤堿具有抗動脈粥樣硬化炎癥和膽固醇代謝紊亂的作用，但青藤堿減輕AS中泡沫細胞炎癥反應機制不甚明了。本課題提出青藤堿可通過影響泡沫細胞內(nèi)的NF-κB信號通路來治

2、療動脈粥樣硬化類疾病的研究工作假說。
　　實驗目的：通過不同濃度的青藤堿（Sinomenine，SIN）體外作用THP-1單核巨噬細胞源性泡沫細胞，觀察泡沫細胞的生物學活性變化及炎性介質包括核因子-κB（Nuclear factor-κB，NF-κB）,IL-1,IL-6及TNF-α的改變探索青藤堿抗動脈粥樣硬化的可能抗炎機制，為青藤堿抗動脈粥樣硬化的臨床應用提供實驗室依據(jù)。
　　實驗方法：PMA刺激THP-1單核細胞24h

3、后，再給予ox-LDL刺激48h建立泡沫細胞模型。實驗分為7個組：正常泡沫細胞組，5μg/mL辛伐他汀組，100μg/mL地塞米松組，青藤堿各濃度組（1μg/mL,20μg/mL,40μg/mL,80μg/mL）。各組分別給予不同含藥培養(yǎng)基，于給藥后24h測量藥物對細胞的生長活性影響；于給藥后12h,24h,48h收集細胞培養(yǎng)上清液及細胞，采用酶比色法測量細胞內(nèi)膽固醇含量，ELISA方法測量NF-κB，IL-1，IL-6，TNF-α的含

4、量，SPSS17.0分析數(shù)據(jù)結果。
　　實驗結果：1、THP-1單核細胞在受到24h PMA刺激及48h ox-LDL刺激后成為泡沫細胞；
　　2、泡沫細胞內(nèi)膽固醇含量增加，膽固醇酯的含量約占總膽固醇含量的一半；
　　3、常規(guī)培養(yǎng)泡沫細胞，細胞存活率隨時間的延長而降低，48h之后活細胞量急劇下降；
　　4、青藤堿能夠有效抑制 THP-1單核細胞源性泡沫細胞的生長活性，在1μg/mL~100μg/mL范圍內(nèi)隨著濃度

5、的增加，青藤堿的抑制作用增強,呈明顯的量-效關系；在對40μg/mL濃度青藤堿干預泡沫細胞的觀察中發(fā)現(xiàn)隨著時間的延長，細胞存活率下降，提示青藤堿對泡沫細胞的生長抑制作用存在一定的時-效關系；5、青藤堿干預后，泡沫細胞內(nèi)的膽固醇酯含量下降，與不給藥組有明顯差異（P<0.01），但與地塞米松陽性組無明顯差別；
　　6、青藤堿能夠抑制泡沫細胞內(nèi)NF-κB的表達，以及NF-κB信號通路下游炎癥分子IL-1，IL-6，TNF-α的分泌，且隨

6、著青藤堿濃度的增加，作用時間的延長，其抑制作用增強，存在一定的量-效關系和時-效關系。
　　實驗結論：1、THP-1單核細胞通過PMA刺激24h可稱為巨噬細胞，再經(jīng)ox-LDL刺激48h可成為泡沫細胞；
　　2、青藤堿可能通過降低NF-κB的含量，以及NF-κB信號通路下游相關炎癥細胞因子IL-1，IL-6，TNF-α的含量來抑制炎癥反應，達到抗動脈粥樣硬化炎癥的作用；
　　3、青藤堿可以通過抑制ox-LDL誘導的TH