苦瓜蛋白對THP-1源性巨噬細(xì)胞泡沫化的影響.pdf

1、泡沫細(xì)胞形成是動脈粥樣硬化(atherosclerosis,As)發(fā)生的核心環(huán)節(jié),膽固醇酯在細(xì)胞內(nèi)蓄積是泡沫細(xì)胞形成的主要生物化學(xué)改變。在膽固醇酯聚積、泡沫細(xì)胞形成的過程中,脂酰CoA-膽固醇?；D(zhuǎn)移酶1(acyl coenzyme A:cholesterol acyltransferase1,ACAT1)催化細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯化,使巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯聚積過多,促進(jìn)泡沫細(xì)胞的形成。苦瓜蛋白(Momordicin,MD)是從苦瓜果肉中分離出的

2、一種分子量為28kDa的水溶性蛋白質(zhì),具有降脂、降血糖、抗炎、抗氧化等作用。關(guān)于苦瓜蛋白是否有抗動脈粥樣硬化的作用,目前的報道還很少。本課題組長期以來研究苦瓜蛋白,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)苦瓜蛋白具有一定的抗動脈粥樣硬化病變的作用。本實驗進(jìn)一步研究苦瓜蛋白對THP-1源性泡沫細(xì)胞的影響,研究苦瓜蛋白對細(xì)胞內(nèi)ACAT1表達(dá)的影響,初步探討苦瓜蛋白對泡沫細(xì)胞的作用機(jī)制。
　　目的:進(jìn)一步研究苦瓜蛋白對THP-1源性泡沫細(xì)胞的影響,并初步探討其可能的機(jī)

3、制,探討其是否與影響ACAT1的表達(dá)有關(guān)。
　　方法:THP-1細(xì)胞,于六孔板中,與佛波脂共育24h后,分別加入ox-LDL、ox-LDL和不同濃度的苦瓜蛋白,共育48h。THP-1與ox-LDL共育不同時間,成為泡沫細(xì)胞以后,再加入苦瓜蛋白分別作用12h和24h。油紅O染色檢測泡沫細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì),高效液相色譜檢測細(xì)胞內(nèi)膽固醇和膽固醇酯。Western blot檢測THP-1源性泡沫細(xì)胞中脂酰CoA-膽固醇?；D(zhuǎn)移酶1(ACAT1)蛋

4、白的表達(dá)。
　　結(jié)果:THP-1細(xì)胞與ox-LDL以及不同濃度的苦瓜蛋白共育48h以后,油紅O染色觀察可見,隨著苦瓜蛋白濃度增加,細(xì)胞內(nèi)脂滴減少,減小明顯。高效液相色譜分析發(fā)現(xiàn),苦瓜蛋白處理組和泡沫細(xì)胞模型對照組內(nèi)的總膽固醇(TC)、膽固醇酯(CE)、CE/TC均明顯高于正常細(xì)胞組,但苦瓜蛋白處理組的TC、CE、CE/TC值亦明顯小于泡沫細(xì)胞模型對照組,差異具有顯著性。Ox-LDL預(yù)先對THP-1作用一段時間之后,再加入苦瓜蛋白分

5、別作用不同時間,油紅 O染色觀察見,苦瓜蛋白處理組細(xì)胞內(nèi)的脂滴明顯少于、小于泡沫細(xì)胞模型對照組,其中,苦瓜蛋白作用24h比作用12h的效果更加明顯。取視野中單個細(xì)胞觀察,見苦瓜蛋白作用組的細(xì)胞內(nèi)的脂滴明顯減少。Western blot結(jié)果表明苦瓜蛋白處理組比泡沫細(xì)胞模型對照組的ACAT1蛋白表達(dá)下調(diào)。
　　結(jié)論:苦瓜蛋白能抑制THP-1源性泡沫細(xì)胞的形成,并減少THP-1源性泡沫細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量,苦瓜蛋白下調(diào)泡沫細(xì)胞內(nèi)ACAT1的表