TNF-α對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞ABCA1表達(dá)的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、第一部分TNF-α對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量及ABCA1表達(dá)的影響 目的：探討炎癥因子TNF-α對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞ABCA1介導(dǎo)的細(xì)胞膽固醇流出途徑的影響。 方法：采用人THP-1細(xì)胞誘導(dǎo)分化形成的泡沫細(xì)胞，測定TNF-α與細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量變化的時(shí)間、濃度關(guān)系。然后選擇合適濃度的TNF-α刺激不同時(shí)間，隨機(jī)將泡沫細(xì)胞分成對(duì)照組、TNF-α組，以RT-PCR法、Westernblot法測定細(xì)

2、胞ABCA1的表達(dá)。 結(jié)果：TNF-α增加THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量呈時(shí)間、濃度效應(yīng)，各濃度組12h后細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量與0h比較明顯升高(p＜0.05)，在10ng/ml時(shí)，TNF-α增加細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量達(dá)到飽和效應(yīng)。10ng/mlTNF-α刺激后以時(shí)間依賴方式下調(diào)ABCA1mRNA和蛋白水平。 結(jié)論：炎癥因子TNF-α可通過抑制THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞ABCA1的表達(dá)而減少細(xì)胞膽固醇的流出，從而加

3、重細(xì)胞內(nèi)膽固醇的蓄積。 第二部分NF-κB活化在TNF-α下調(diào)THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞ABCA1表達(dá)中的作用 目的：探討NF-κB活化在THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞ABCA1表達(dá)中的作用。方法體外培養(yǎng)THP-1細(xì)胞并構(gòu)建泡沫細(xì)胞模型，使用TNF-α和NF-κB活化抑制劑TPCK孵育細(xì)胞，以RT-PCR法、Western法測定THP-1源性泡沫細(xì)胞ABCA1mRNA和蛋白表達(dá)情況，借助SandwichELISA法觀

4、察核因子κB活化/核易位情況。 結(jié)果：TNF-α可即刻激活NF-κB，并導(dǎo)致干預(yù)24h后泡沫細(xì)胞ABCA1mRNA和蛋白表達(dá)下調(diào)；若預(yù)先用TPCK孵育，則TPCK可抑制TNF-α對(duì)NF-κB的激活，且24h后泡沫細(xì)胞ABCA1mRNA和蛋白表達(dá)下調(diào)幅度減??；TPCK延遲孵育則對(duì)TNF-α的效應(yīng)抑制不顯著。 結(jié)論：炎癥因子TNF-α可即刻激活NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，早期活化的NF-κB可阻遏THP-1源泡沫細(xì)胞ABCA1基