竹節(jié)參皂苷對衰老大鼠腦組織氧化應激和自噬途徑的作用研究.pdf

1、目的：通過制備24月齡自然衰老大鼠模型并用竹節(jié)參皂苷（SPJ）加以干預，研究SPJ對衰老大鼠腦組織的保護作用，并從氧化應激和自噬途徑探討其發(fā)揮保護作用的機制；通過H2O2誘導SH-SY5Y神經細胞氧化應激損傷模型，研究SPJ對SH-SY5Y神經細胞的保護作用，進一步明確其對衰老大鼠腦組織的保護作用機制。
　　方法：
　　實驗一：將SPF級雄性SD大鼠隨機分為：3月齡組（3M組）、9月齡組(9M組)、15月齡組（15M組），2

2、4月齡衰老組（24M組），SPJ低、中、高劑量組，各組均10只大鼠。大鼠從18月齡開始，按SPJ（10 mg/kg、30 mg/kg、60 mg/kg）灌胃至24月，每周停藥兩天，連續(xù)6個月后進行實驗。處理后的大鼠運用HE染色觀察海馬CA1、CA3和DG區(qū)神經元形態(tài)變化，透射電鏡觀察海馬區(qū)神經元超微結構，生化法檢測腦組織皮層中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）的活性、丙二醛（MDA）的含量、Na+/K+-ATP

3、酶（ATPase）、Ca2+-ATPase和Ca2+/Mg2+-ATPase活性， Western Blot法測定腦組織海馬和皮層中p21、Bcl-2、Bax、沉默信息調節(jié)蛋白1（Sirt1）、過氧化物酶體增殖活化受體γ輔助活化因子1α（PGC-1α）、叉形頭轉錄因子的O亞型（Foxo3a）、微管相關蛋白I輕鏈3-II（LC3II）和Beclin1的蛋白含量。
　　實驗二：將正常SH-SY5Y神經細胞分為正常對照組，H2O2（60

4、0μmol/L）處理組和H2O2+ SPJ（0.1μg/mL、1μg/mL、5μg/mL、20μg/mL）預處理組。體外培養(yǎng)SH-SY5Y細胞，加入SPJ孵育12小時，再加入H2O2作用12小時建立氧化應激損傷模型進行后續(xù)實驗。MTT法檢測細胞活力，生化法檢測細胞乳酸脫氫酶（LDH）釋放量、SOD活性、MDA含量、活性氧（ROS）含量和線粒體膜電位（MMP），Hoechst33342觀察細胞形態(tài)，Western Blot法測定細胞內Bc

5、l-2、Bax、Sirt1、PGC-1α、Foxo3a、LC3II和Beclin1的蛋白含量。
　　結果：
　　實驗一：與3M組青年大鼠比較，24M組衰老大鼠海馬CA1、CA3和DG區(qū)神經元排列紊亂，且形狀不規(guī)則和核深染，胞核邊緣不清晰，且有大量脂褐質沉積，海馬和皮層中p21蛋白表達顯著增加，Bcl-2/Bax的比值顯著下降；與24M組衰老大鼠比較，SPJ各劑量組能顯著改善衰老大鼠海馬CA1、CA3和DG區(qū)神經元形態(tài)和海馬區(qū)

6、神經元超微結構，顯著降低腦組織海馬和皮層中p21蛋白含量、升高Bcl-2/Bax的比值，明顯增強腦皮層神經元內SOD和GSH-Px活力和降低MDA的含量，有效逆轉Na+/K+-ATPase、Ca2+-ATPase和Ca2+/Mg2+-ATPase活性，不同程度地促進Sirt1、PGC-1α、Foxo3a、LC3II和Beclin1蛋白的表達。
　　實驗二：與正常對照組比較，H2O2刺激SH-SY5Y神經細胞后細胞存活率顯著下降，L

7、DH釋放量、MDA含量、細胞內ROS的含量明顯上升，SOD活力和MMP顯著下降；與H2O2組比較，SPJ能顯著增加H2O2致氧化應激損傷SH-SY5Y神經細胞存活率，降低細胞上清中LDH釋放量、MDA含量、細胞內ROS含量和細胞MMP，升高細胞內SOD的活力；Hoechst33342染色觀察發(fā)現(xiàn)，SPJ各劑量組能夠明顯改善細胞凋亡形態(tài)；Western blot結果分析發(fā)現(xiàn)，SPJ各劑量組均能不同程度地升高Bcl-2/Bax的比值和促進S