竹節(jié)參皂苷免疫佐劑作用的實驗研究.pdf

1、目的：采用高效液相色譜法（HPLC）篩選了竹節(jié)參皂苷中具有免疫佐劑效果的有效部位，進而研究并探討了此有效部位作為HBsAg抗原佐劑的作用及可能機制，為竹節(jié)參皂苷作為免疫佐劑的開發(fā)研究奠定基礎(chǔ)。
　　方法：⑴通過D101大孔吸附樹脂和HPLC進行竹節(jié)參皂苷成分的初步分離和分析；⑵體外無菌分離小鼠脾淋巴細胞，培養(yǎng)、給藥，MTT法檢測不同濃度乙醇洗脫的竹節(jié)參皂苷中具有最佳免疫佐劑活性的部位；⑶取6周雌性Balb/c小鼠54只，隨機分為6

2、組，每組9只：正常組（Z）、抗原組（HBsAg，5μg/只）、抗原+60％乙醇洗脫的竹節(jié)參皂苷低劑量組（HBsAg+60%低，300μg/只）、抗原+60%乙醇洗脫的竹節(jié)參皂苷高劑量組（HBsAg+60%高，600μg/只）、抗原+人參皂苷rg1低劑量組（HBsAg+rg1低，50μg/只）、抗原+人參皂苷rg1高劑量組（HBsAg+rg1高，100μg/只）；分別在第0、7和21天皮下接種疫苗，各組分別給予生理鹽水、HBsAg、HBs

3、Ag+60%低、HBsAg+60%高、HBsAg+rg1低和HBsAg+rg1高，末次免疫7天后頸椎脫臼處死老鼠；CCK-8法檢測抗原HBsAg和ConA誘導(dǎo)小鼠淋巴細胞增殖的情況；間接ELISA法檢測小鼠血清中IgG、IgG1和IgG2b抗體滴度；RT-PCR法檢測細胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-10的表達量；流式細胞儀檢測細胞表面蛋白TLR4和TLR9的表達。
　　結(jié)果：①實現(xiàn)了竹節(jié)參皂苷中各段物質(zhì)的分離及確定了

4、各段竹節(jié)參皂苷中所含的主要成分：30%段皂苷為極性較強的糖類物質(zhì)，60%段皂苷為齊墩果烷型皂苷和達瑪烷型皂苷，90%段幾乎全部為齊墩果烷型皂苷；②MTT法初步確定了竹節(jié)參皂苷中60%段具有最強的免疫活化活性（P<0.01）；③竹節(jié)參皂苷和人參皂苷rg1能夠增強HBsAg抗原誘導(dǎo)的小鼠淋巴細胞增殖（P<0.05）；竹節(jié)參皂苷和人參皂苷rg1能夠顯著增強小鼠血清中抗HBsAg的IgG、IgG1和IgG2b亞型抗體滴度（P<0.05）；竹節(jié)參