海洋分枝桿菌中P450蛋白和人源TCF蛋白截短體的晶體學研究.pdf

1、海洋分枝桿菌(Mycobacterium marinum)是一種非結核桿菌，主要感染魚類，當其感染了人類時，細菌會主要分布在皮膚上，很少有深入感染。海洋分枝桿菌與結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis，簡稱Mtb或TB)親緣關系密切，其氨基酸序列相似性高達85％，廣泛用作研究結核分枝桿菌致病性的模式細菌。細胞色素P450是一種單加氧酶，廣泛存在于從細菌到人類的各種生物體內，在生命代謝過程中發(fā)揮著重要作用。結核

2、分枝桿菌中含有20種P450，其基因密度遠遠高于其他生物，這說明P450蛋白在其致病性及抗藥性功能中發(fā)揮著重要作用。目前對CYP126A3和CYP105Q4的底物及功能方面的研究較少，經蛋白序列比對發(fā)現兩種蛋白與結核分枝桿菌中的兩種P450蛋白分別有39%和33%的同源性。我們希望通過對兩種蛋白結構的研究推測其在海洋分枝桿菌中可能的功能及其底物類型，進而為了解結核桿菌的致病性及抗藥性機制提供一定的線索。
　　T細胞因子（TCF）在

3、經典Wnt信號通路中有著至關重要的作用，它能夠招募β-catenin與目的基因進行結合，進而調控下游目的基因的表達。近年來的研究發(fā)現TCF蛋白中存在兩個DNA結合結構域即HMG DNA結合結構域和C-clamp結構域。C-clamp結構域在TCF蛋白與DNA的結合及對下游基因的激活具有重要作用，特別是對一些較弱的Wnt反應元件（WREs）。而這些較弱的WREs通常對細胞的生長和細胞周期發(fā)揮著重要的調節(jié)作用。且C-clamp結構域從果蠅到

4、人體都很保守，這說明其在生物體基因調控中發(fā)揮著重要作用。
　　本論文利用結構生物學的手段和方法，對所研究的蛋白進行了克隆，表達，純化，結晶條件的嘗試和數據的收集。通過 X射線衍射技術，收集得到來源于海洋分枝桿菌的CYP126A3蛋白一套分辨率為1.75?的數據。通過數據的分析處理得知，該晶體一個不對稱單位只有一個蛋白分子，溶劑含量為52.1%，馬修斯常數為2.57?3Da-1。該晶體的晶胞參數為a=63.08，b=105.84，c