小干擾RNA在乙型肝炎病毒感染小鼠中的抗病毒作用.pdf

1、目的:建立一種簡便、有效、穩(wěn)定的乙型肝炎病毒(HBV)感染的動物模型,觀察該模型動物體內(nèi)不同時間點各種HBV標(biāo)志物的表達情況;分別以HBVS區(qū)、C區(qū)和S區(qū)聯(lián)合C區(qū)為靶位,觀察細胞體外能有效抗HBV的小干擾RNA(siRNA)在動物體內(nèi)抗HBV的效果。 方法: (1)以流體動力學(xué)法尾靜脈注射BALB/c小鼠不同劑量pcDNA3.1-HBV(pHBV),第2天時間分辨免疫熒光分析法(IFMA)檢測乙型肝炎表面抗原(HBsAg

2、),確定構(gòu)建動物模型的pHBV最佳劑量。同樣方法注射小鼠最佳劑量pHBV,1周內(nèi)檢測各種HBV標(biāo)志物,IFMA法檢測血清中HBsAg、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、抗HBs、抗HBe和抗HBc;熒光定量PCR法(FQ-PCR)檢測血清HBV DNA;免疫組織化學(xué)法檢測肝組織HBsAg和乙型肝炎核心抗原(HBcAg)。 (2)將pHBV和不同劑量的細胞體外實驗證明有效的S區(qū)siRNA質(zhì)粒尾靜脈共注射BALB/c小鼠,IFMA法檢N

3、d,鼠血清中HBsAg,確定最佳干擾劑量。用最佳劑量的S區(qū)、C區(qū)或S區(qū)聯(lián)合C區(qū)siRNA質(zhì)粒和pHBV共注射小鼠,IFMA法檢測血清中HBsAg的表達情況;FQ-PCR檢測血清HBV DNA的變化:RT-PCR法檢測HBV S-mRNA或HBV C-mRNA的表達水平;并且免疫組織化學(xué)法檢測siRNA對肝組織內(nèi)HBsAg和HBcAg表達的影響。 結(jié)論: (1)以流體動力學(xué)法建立的HBV模型是一種新型、簡便、有效的HBV感