ADMA抗體的制備及ELISA檢測方法的建立.pdf

1、ADMA，即非對稱二甲基精氨酸簡稱，是內(nèi)源性一氧化氮合酶的競爭性抑制劑，減少一氧化氮的生成，并誘發(fā)氧自由基生成，促進炎癥反應(yīng)，是影響血管內(nèi)皮細胞功能障礙的重要因素。血漿中ADMA濃度升高與多種心血管發(fā)病風險因子相關(guān)，并參與調(diào)解這些風險因子對內(nèi)皮血管的作用。大量證據(jù)表明ADMA是心血管疾病發(fā)生發(fā)展的標志物。許多前瞻性研究表明ADMA能獨自顯著的預(yù)示心血管疾病和死亡率的發(fā)生（早期的冠狀動脈病變，ADMA升高19％時，就會導(dǎo)致急性動脈病變的產(chǎn)

2、生，器官衰竭，ADMA升高42％時，就會致死）。ADMA與心血管疾病發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，可能是一個新的心血管疾病的標志物。國外對ADMA研究要早，且已經(jīng)生產(chǎn)出ADMA檢測試劑盒并應(yīng)用于臨床研究階段。目前國內(nèi)還沒有研制出針對ADMA檢測的試劑盒，只有少部分的工作者致力于ADMA與疾病發(fā)生的關(guān)系的研究并且只是停留于實驗室階段。鑒于此，為填補國內(nèi)空白，本題欲采用ELISA或膠乳的方法研制出ADMA的檢測試劑盒，應(yīng)用于臨床以提前預(yù)測疾病的發(fā)生，及

3、早干預(yù)，減少病人的痛苦和醫(yī)生工作者的壓力，減少社會負擔。目前，本題主要開展了以下研究:
　　 本文首先設(shè)計合成并鑒定了兩種ADMA半抗原:ADMA-CYS-ACA和nADMA-SMCC;采用活性酯法制備并鑒定了一種免疫原nADMA-SMCC-KLH;采用混合酸酐法制備并鑒定了兩種包被原nADMA-SMCC-BSA和ADMA-CYS-ACA-BSA;其中以免疫原nADMA-SMCC-KLH和包被原ADMA-CYS-ACA-BSA的

4、異源免疫分析組合效果最好。
　　 將制備的免疫原免疫新西蘭大白兔以制備抗ADMA多克隆抗體，共獲得70ml免疫血清，并進行免疫特性分析，其抗體效價高達1∶512000，Westernblot檢測表明抗體效價高、特異性強，實驗獲得了高效價的特異性的抗ADMA抗體，為進一步研究內(nèi)皮功能障礙相關(guān)的多種心血管疾病的檢測打下基礎(chǔ)。
　　 將制備的免疫原免疫BALB/C小鼠以制備抗ADMA單克隆抗體，共獲得2株可穩(wěn)定分泌抗ADMA單