莪術(shù)醇聯(lián)合氟尿嘧啶對裸鼠胃癌移植瘤生長及PCNA和P27表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的:胃癌是目前最常見的惡性腫瘤之一，由于早期的診斷率低，患者在就診時大多已處于進(jìn)展期。目前化療已經(jīng)成為進(jìn)展期胃癌及術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移胃癌的主要治療手段，有的病人對化療不能耐受，而中藥具有毒副作用低，可提高機(jī)體免疫力等優(yōu)點，中藥聯(lián)合化療治療胃癌逐漸被應(yīng)用于臨床。本實驗以人胃癌BGC823細(xì)胞建立裸鼠皮下移植瘤為研究模型，觀察莪術(shù)醇及氟尿嘧啶對于腫瘤增殖的影響并對其機(jī)制進(jìn)行探討。
　　方法:
　　1、建立人胃癌BGC823細(xì)胞皮下移

2、植裸鼠模型
　　收集體外培養(yǎng)的對數(shù)生長期BGC823細(xì)胞，配制成濃度為5106/ml的細(xì)胞懸液后進(jìn)行裸鼠皮下注射，獲得人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型。
　　2、對人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤進(jìn)行藥物干預(yù)。當(dāng)皮下移植瘤生長至10mm時，將其隨機(jī)分為4組，對照組、莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組。對照組給予生理鹽水;莪術(shù)醇組給予莪術(shù)醇;氟尿嘧啶組給予氟尿嘧啶;聯(lián)合用藥組給予氟尿嘧啶和莪術(shù)醇，每隔4天給予藥物瘤體內(nèi)注射，與末次藥

3、物干預(yù)4天后脫頸處死裸鼠。
　　3、對人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤體積和重量的檢測。每次藥物干預(yù)前和處死裸鼠后測量移植瘤的最長徑(A)及最短徑(B)，根據(jù)公式:腫瘤體積（mm3）=1/2(A B2)，計算腫瘤的近似體積。處死各組裸鼠后，完全剝離瘤體并測量瘤重、計算抑瘤率。腫瘤抑瘤率=（對照組瘤重—實驗組瘤重）/對照組瘤重100％。
　　4、應(yīng)用MTT法檢測0h、24h、48h、72h移植瘤細(xì)胞的增殖。用機(jī)械法將四組不

4、同處理因素的瘤體制備成懸浮細(xì)胞，測定各組在0h、24h、48h、72h時的OD值，計算細(xì)胞的增殖抑制率。
　　5、應(yīng)用qRT-PCR方法檢測人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤組織中PCNA、P27mRNA的表達(dá)。
　　6、應(yīng)用免疫組織化學(xué)法（S-P法）檢測人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤組織中PCNA、P27蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1、人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤模型的建立成功建立人胃癌BGC

5、823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤模型，成瘤率100％(20/20)。
　　2、莪術(shù)醇及氟尿嘧啶對人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤的影響
　　2.1移植瘤的體積
　　各實驗組腫瘤終體積分別為:莪術(shù)醇組（1795.48±56.86）mm3、氟尿嘧啶組（1439.50±31.13）mm3、聯(lián)合用藥組（1363±37.54）mm3，對照組腫瘤終體積（2195.83±54.00）mm3。各實驗組腫瘤終體積均明顯小于對照組腫瘤終體積，

6、差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);與莪術(shù)醇組相比，聯(lián)合用藥組腫瘤終體積明顯減小，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);與氟尿嘧啶組相比，聯(lián)合用藥組腫瘤終體積有減小趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　2.2移植瘤的抑瘤率
　　各實驗組腫瘤體積分別為:莪術(shù)醇組（1.51±0.99）g、氟尿嘧啶組（1.27±0.02）g、聯(lián)合用藥組（1.05±0.10）g，對照組腫瘤的重量（1.88±0.09）g。各實驗組腫瘤重量均明顯小

7、于對照組腫瘤重量，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);與莪術(shù)醇組相比，聯(lián)合用藥組腫瘤重量明顯減小，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);與氟尿嘧啶組相比，聯(lián)合用藥組腫瘤重量有減小趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　3、莪術(shù)醇及氟尿嘧啶對人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植腫瘤細(xì)胞增殖的影響
　　MTT結(jié)果顯示:0小時的對照組、莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組的OD值分別為0.129±0.023、0.131±0.019、0

8、.126±0.020、0.128±0.021;24小時的對照組、莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組組的OD值分別為0.236±0.054、0.232±0.041、0.238±0.037、0.234±0.050;48小時的對照組、莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組的OD值分別為0.512±0.056、0.416±0.068、0.382±0.069、0.358±0.067;72小時的對照組、莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組的OD值分別為0.70

9、2±0.051、0.623±0.058、0.562±0.061、0.519±0.082。其中0小時和24小時，各實驗組與對照組相比無明顯差異(P＞0.05)，而48小時和72小時時，各實驗組明顯低于對照組(P＜0.05)。
　　4、人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤組織中PCNA、P27 mRNA的表達(dá)
　　4.1 PCNA mRNA的表達(dá)
　　各實驗組裸鼠胃癌移植瘤組織中PCNAmRNA的相對表達(dá)量分別為:莪術(shù)醇組

10、(0.8673±0.0452)、氟尿嘧啶組（0.7553±0.0460）及聯(lián)合用藥組（0.5327±0.0284），與對照組（1.001±0.0682）相比顯著降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）;與莪術(shù)醇組相和氟尿嘧啶組比，聯(lián)合用藥組PCNAmRNA的相對表達(dá)量明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。
　　4.2 P27mRNA的表達(dá)
　　各實驗組裸鼠胃癌移植瘤組織中P27mRNA的相對表達(dá)量分別為:莪術(shù)醇組（1

11、.8037±0.3175）、氟尿嘧啶組（2.0274±0.2319）及聯(lián)合用藥組(2.5566±0.3268)，與對照組（1.010±0.1746）相比顯著升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05);與莪術(shù)醇組相比，聯(lián)合用藥組P27mRNA的相對表達(dá)量明顯丹高，差異具有統(tǒng)計學(xué)差異;與氟尿嘧啶組相比，聯(lián)合用藥組P27mRNA的相對表達(dá)量有升高趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　5、人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤組織PCN

12、A、P27蛋白表達(dá)。
　　5.1對照組、莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組PCNA蛋白陽性百分比分別為:（73.56±2.26）％、(56.94±2.58)％、（44.05±1.70）％、(40.17±2.90)％。與對照組相比均，各實驗組PCNA陽性表達(dá)率明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);與莪術(shù)醇組相比，聯(lián)合用藥組PCNA陽性表達(dá)率明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)差異;與氟尿嘧啶組相比，聯(lián)合用藥組PCNA陽性表達(dá)率有降低趨勢，

13、但無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　5.2對照組、莪術(shù)醇組、氟尿嘧啶組、聯(lián)合用藥組P27蛋白陽性百分比分別為:（33.67±2.36）％、(51.06±1.98)％、(60.28±2.01)％、（71.67±2.29）％。與對照組相比，各實驗組P27蛋白陽性百分比明顯升高差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);與莪術(shù)醇組和氟尿嘧啶組相比，聯(lián)合用藥組P27陽性表達(dá)率明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。
　　結(jié)論:

14、>　　1、莪術(shù)醇能抑制人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤的生長，使其生長速度減慢。
　　2、莪術(shù)醇可抑制人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤細(xì)胞的增殖，有效降低了人胃癌BGC823細(xì)胞的增殖。
　　3、莪術(shù)醇聯(lián)合氟尿嘧啶能抑制人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤的生長，較單用莪術(shù)醇相比具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。
　　4、莪術(shù)醇聯(lián)合氟尿嘧啶能抑制人胃癌BGC823細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤的生長，但較單用氟尿嘧啶相比無顯著統(tǒng)計學(xué)差異