LIMK1過表達(dá)對羅格列酮抑制胃癌裸鼠移植瘤的影響.pdf

1、目的：通過構(gòu)建過表達(dá)LIMK1的MGC-803穩(wěn)定細(xì)胞株，觀察LIMK1與羅格列酮（Rosiglitazone，ROS）對胃癌細(xì)胞裸鼠移植瘤的影響。
　　方法：構(gòu)建慢病毒介導(dǎo)的含有過表達(dá) LIMK1的病毒載體系統(tǒng)并對MGC-803細(xì)胞進(jìn)行感染，篩選穩(wěn)定過表達(dá)LIMK1的細(xì)胞株。用qPCR及Western blot對穩(wěn)定細(xì)胞株進(jìn)行鑒定。收集好OE組、NC組和空白對照組三組細(xì)胞接種于裸鼠前肢腋下，觀察裸鼠成瘤情況。待移植瘤體積長至10

2、0mm3時，在成瘤的三組細(xì)胞里隨機(jī)各均分為兩組，每組8只，共6組。實(shí)驗(yàn)組予以羅格列酮100mg/kg/2d灌胃處理，對照組予以生理鹽水灌胃。每6天測量瘤體的長短徑，并稱重，以此繪制移植瘤生長曲線圖。48天以后，把成瘤的裸鼠處死，檢測每組移植瘤的大小、重量并計(jì)算抑瘤率。HE染色觀察移植瘤形態(tài)學(xué)變化，免疫組織化學(xué)方法和Western blot檢測ROS處理后裸鼠移植瘤LIMK1蛋白表達(dá)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：1.成功地構(gòu)建了穩(wěn)定

3、過表達(dá)LIMK1的MGC-803細(xì)胞系。
　　用慢病毒介導(dǎo)的過表達(dá)LIMK1的病毒載體去感染MGC-803細(xì)胞，檢測到細(xì)胞的綠色熒光提示病毒成功感染了MGC803細(xì)胞，經(jīng)嘌呤霉素對細(xì)胞進(jìn)行篩選，可觀察到細(xì)胞的綠色熒光穩(wěn)定表達(dá)。qPCR及Western blot實(shí)驗(yàn)顯示，過表達(dá)LIMK1的 mRNA與蛋白表達(dá)水平較空載體組上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而轉(zhuǎn)染空載體組的MGC803細(xì)胞與空
　　白對照組相比，LIMK1

4、的蛋白表達(dá)水平，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　2. ROS對過表達(dá)LIMK1的MGC803細(xì)胞裸鼠移植瘤的影響。
　?。?）對移植瘤生長的影響：IMK1過表達(dá)組移植瘤的體積及重量明顯高于空白對照組和NC組，而ROS灌藥組的體積及重量明顯低于未灌藥組。經(jīng)計(jì)算灌藥組均有一定的抑瘤率。
　?。?）對移植瘤形態(tài)學(xué)的影響：未灌藥組較ROS灌藥組組的細(xì)胞異型性大，細(xì)胞間質(zhì)多，細(xì)胞核染色深，核質(zhì)比多，細(xì)胞排列紊亂，其中LI

5、MK1過表達(dá)組最為明顯。
　?。?）對移植瘤蛋白表達(dá)的影響：各組移植瘤中均有LIMK1蛋白的表達(dá)（棕黃色顆粒，為胞質(zhì)或胞膜），在40倍物鏡下對比觀察，以C組（LIMK1過表達(dá)）最為明顯,未灌藥組(A、B、C)較 ROS灌藥組（D、E、F）的LIMK1蛋白表達(dá)強(qiáng)。
　　結(jié)論：1.LIMK1過表達(dá)可以促進(jìn)MGC-803細(xì)胞裸鼠移植瘤的生長。
　　2.羅格列酮可以抑制MGC-803細(xì)胞裸鼠移植瘤的的生長。
　　3.LI